IL-1β 的样本，比抗体难

Anti-IL-1 beta，兔多抗，WB、IHC、ELISA 三个系统

巨噬细胞刺激六小时，收上清，也收了裂解液。

上清跑 WB，IL-1β 那条带时有时无；裂解液跑出来，前体位置上有带，成熟片段几乎看不到。

同一管样本，同一支抗体，两个结果。

带时有时无的时候，先别怀疑抗体，先看样本是怎么收的。

分泌型靶点的样本处理

IL-1β 是分泌型细胞因子，合成之后要经过剪切才释放到胞外。

上清里的量取决于刺激时间和细胞状态，收样时间差一小时，浓度就能差一截。

上清直接上样，蛋白量太低。常用的做法是先浓缩，超滤管按 10 kDa 截留，或者用冷丙酮沉淀。

裂解液里主要是前体，检测前体就把诱导时间缩短，别等细胞都死了再收。

反复冻融对这类小分子量蛋白不友好，收完分装成单次量，一次一支。

刺激方案也会改变两部分的量。只用脂多糖，前体占多数；再加一步 ATP 刺激，上清里的成熟片段才明显起来。

这支抗体的三个系统

产品页写的验证系统是 WB、IHC-P 和 sELISA，反应种属写的是人。

宿主是兔，多克隆，没有标亚型。多抗的好处是认多个表位，对小分子量靶点相对宽容；代价是批间差异要靠自己盯。

稀释比这一栏，产品页没有给出固定值。这种情况只能自己摸，从上样量入手比从抗体浓度入手快。

sELISA 的用法和夹心 ELISA 不是一回事，具体配对抗体要看试剂盒说明，不要拿这支当检测抗体直接用。

没有固定稀释比，也能看出这支抗体的适用面比较宽，从组织切片到溶液相都能用。宽归宽，每个系统还是得重新定条件。

石蜡切片上的判读

IHC-P 染 IL-1β，阳性在胞质，分布散，不像膜蛋白那样有清楚的轮廓。

炎症样本里阳性细胞成簇，正常组织里少。判读要带阴性组织做对照，不然很容易把背景当成低表达。

抗原修复用柠檬酸还是 Tris/EDTA，产品页没写死，两种都试一张，选背景低的那组。

切片上的阳性面积和 WB 的条带强度不能互相印证，两个系统的动态范围差太远。

三条能落地的

上清收样时间固定在刺激后同一小时，所有组一起收，别一组一组来。

上清先浓缩十倍再上样，裂解液按总蛋白定量上样，两条线分开算。

抗体从 1/500 起摸三个点，1/500、1/1000、1/2000，同一张膜跑，选信噪比最高的那个。

下一次收样，上清和裂解液各留一管冻在负八十，等抗体条件定下来再一起跑。

关键参数

反应种属	Human
抗原名称	IL1B
验证应用	WB, IHC, ELISA
宿主/亚型	Rabbit / Unknown
抗体类型	Polyclonal
纯化方式	Affinity purification Immunogen
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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