基底膜那层，薄得容易丢
Anti-Laminin 兔多抗，天然全长免疫原
肾皮质的切片染完，肾小球里该有一圈贴着毛细血管的线，结果整团都发棕。血管壁周围也一样，看不出边界。
学生说这是基底膜染色。基底膜不是一团，是一条。
Laminin 是基底膜的主要成分
Laminin 是一个大分子糖蛋白，由 α、β、γ 三条链组成异三聚体，靠卷曲螺旋结构拼在一起。
它和 IV 型胶原、巢蛋白、硫酸肝素蛋白多糖一起构成基底膜。上皮细胞、内皮细胞、施万细胞都贴着这层膜站。
基底膜在光学显微镜下的厚度常常只有几百纳米。切片厚了，一层膜在两三个焦平面上重复出现，看起来就像一片弥漫的着色。
所以切片厚度是第一步。肾和肺这类器官，三到四微米比五微米好判。
天然全长蛋白做免疫原，Dot 也能用
这支的免疫原写的是人 LAMA1 的天然全长蛋白，不是合成肽，也不是重组片段。
天然的构象表位在三维折叠里，用全长蛋白免疫得到的多抗，能识别折叠状态下暴露的位点。这类抗体在组织切片上通常表现得更贴近真实分布。
产品页标的分子量是 170 kDa 附近。实际样本里 laminin 的条带常常偏上，糖基化和链间交联都会影响迁移。
反应种属写的是人和小鼠。做其他物种要先验证。
应用栏里有 IHC 和 Dot 两项。Dot 是直接把样本点在膜上，不做电泳。
这一项在细胞外基质研究里有用。纯化得到的 laminin 或者基质胶制品，想知道里面有没有目标蛋白，点样比跑胶快，也不需要担心大分子量蛋白进不了胶。
做 Dot 的时候，封闭液要选不含明胶的。明胶本身就是变性胶原，和基质样本里的成分有交叉，背景会压不住。
判断标准只有一条
基底膜染色的合格标准，是线。不是深浅，是边界。
正常肾小球里，laminin 沿着毛细血管袢分布，鲍曼囊内侧也有一层。两层线之间是系膜区，那里信号弱。
糖尿病肾病或者膜性肾病的时候，这层线会变厚，但仍然是线。线变粗和线糊成片，是两件事。
三条操作建议
抗原修复用蛋白酶 K 消化，室温十分钟，比热修复温和。基质蛋白的交联多，热修复容易让膜结构散开。
一抗孵育四度过夜。基底膜上的表位密度不高，时间长一点信号更实。
封闭用 5% 正常山羊血清，不要用 BSA 单独封。BSA 里常带微量蛋白杂质，基质样本上容易出现斑点。
下次看片子，先在十倍镜下找那条线。找不到线，先换切片厚度，再换抗体。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse |
| 抗原名称 | LAMA1 |
| 验证应用 | IHC, Dot |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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