内质网标记，先确认它在挨着核
Anti-Calnexin 兔多抗，敲除验证过
铺在玻片上的细胞染完，绿色信号铺满了整个胞质，连细胞边缘都是亮的。学生说这是内质网。
内质网不是铺满的。它在核周围最密，往外延伸成网，细胞边缘通常是薄的。
Calnexin 是内质网的分子伴侣
Calnexin 是内质网膜上的 I 型跨膜蛋白，属于凝集素类分子伴侣。
新生肽链进内质网之后，如果带着未折叠的糖基，calnexin 会结合上去，帮它折叠，折不好就送去做降解。它是内质网质量控制的一环。
因为它常驻在膜上，染色呈现的是内质网的形状，不是内质网腔里的内容物。核周那一圈密集的信号，是内质网最厚的区域。
判读的时候，先看核周。核周没有加厚，只有满视野的均匀绿色，多半是背景，不是阳性。
敲除验证与种属覆盖
产品页写明这支的特异性在敲除样本里确认过。
多抗是混合克隆，批次之间的表位偏好会有差别。敲除样本给出的阴性结果，是一条硬证据，说明信号来自这个基因的产物。
做免疫沉淀的时候，这一条同样管用。拉下来的蛋白跑胶，目标位置有带，别的带少，说明抗体干净。
反应种属写的是人、小鼠、大鼠。
再往下看验证的段落，写的是在人样本里做过 ICC/IF、IP、WB。
这两处不完全一致。做小鼠和大鼠样本的时候，抗体很可能会认，但没有官方的验证数据兜底。第一次做，带一张人源阳性样本并排跑，或者至少带一个敲低对照。
三个应用各自的要点
WB 看内质网富集组分。全细胞裂解液里 calnexin 的量不小，但用差速离心拿微粒体组分，条带的信噪比会好很多。
IF 的关键是透化。calnexin 的表位在膜的内侧，不透化抗体进不去，看到的只是轮廓。0.1% Triton 室温十分钟，或者皂苷处理，两种都行。
IP 用这支，裂解液里别加高浓度 SDS。膜蛋白一旦被彻底变性，抗体认的表位也跟着丢。
三条操作建议
缓冲液里带 0.02% 叠氮钠，储存条件里还有一句避光保存。取用的时候别把管子放在灯下。
封闭液用含 5% 血清的缓冲液，室温三十分钟。内质网蛋白在多数细胞里丰度高，封闭不足的时候背景抬得很快。
双标挑一个不同区室的标记做对照。高尔基体或者溶酶体都行，两个信号分开，说明定位是真的。
做药物处理的时间序列，calnexin 的总量变化往往不大。它更适合当内参用，用来对照内质网应激下游那些变化剧烈的蛋白。
下次看荧光图，先把物镜推到一百倍看核周那一圈，加厚了才算数。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | CANX |
| 验证应用 | WB, IF/ICC, IP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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