做中和实验，先看缓冲液配方

Anti-TNF alpha 兔多抗，内毒素低于 10 pg/ml

细胞上清里的 TNF 测出来比预期低，同一批样本用另一套试剂盒复测，数值又对得上。查了两天，问题出在培养体系里加了抗体。

加的是抗 TNF 的抗体，本意是做封闭。这个思路没错，但这支抗体能不能用于功能实验，得先看它的配方。

图 1　Western blot 验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

缓冲液里只有盐

这支的缓冲液写的是 0.88% 氯化钠和 0.424% 磷酸钾溶液，pH 7.2。

没有 BSA，没有明胶，没有叠氮钠。这三样东西在普通抗体里很常见，前两样是载体蛋白，后一样是防腐剂。

载体蛋白会干扰功能实验。BSA 里常带内毒素和脂质，加到细胞培养体系里，本身就会刺激巨噬细胞分泌细胞因子。做出来的结果分不清是处理的效果还是 BSA 的效果。

叠氮钠的问题更直接。它抑制细胞色素氧化酶，对活细胞有毒性，浓度低一点也会影响代谢读数。

配方干净，是这支能进功能实验的前提。

内毒素这一项是硬指标

产品页给了内毒素含量，鲎试剂法测定，低于 10 pg/ml。

做中和实验，这个数比效价更关键。内毒素本身是强刺激，1 ng/ml 的量级就足以让巨噬细胞活化。抗体里带的内毒素超过样本里的处理效应，结果就不成立了。

应用栏里有一项 Neut，也就是中和。产品页把它列出来，说明这个用途在验证范围内。

应用还包括 ELISA、WB、IHC-P、ICC/IF、IF，一共六项。

TNF 的信号形式不止一种

TNF alpha 是 26 kDa 的 II 型膜蛋白，被 TACE 切下来之后变成 17 kDa 的可溶形式，可溶形式再聚成三聚体才有活性。

膜结合型和可溶型都能结合受体，但两者的效力不一样。做中和实验的时候，目标如果是膜结合型，抗体要能接触到细胞表面；如果测的是上清里的可溶型，抗体加进培养基就行。

ELISA 测上清，用的是可溶型。WB 跑出来 26 kDa 和 17 kDa 两条带，分别是两种形式，不要当成降解。

反应种属写的是人和食蟹猴。做小鼠的样本，这支不适用。

三条操作建议

稀释的时候补载体蛋白。原液里没有 BSA，稀释放大之后抗体容易吸附到管壁上，加 0.1% 的 BSA 或者用低吸附管，回收率会好一些。

中和实验先做剂量曲线。抗体和 TNF 的摩尔比从 1 比 1 往上走到 10 比 1，找出完全中和的点，再定正式实验的用量。

设一个同型对照。兔 IgG 同亚型的无关抗体，同样的浓度加进去，排除抗体本身对细胞的效应。

明天做预实验，配液那一步把 BSA 补上，剂量曲线跑六个点，从 1 比 1 到 10 比 1。

关键参数

图 2　免疫组化 验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

相关产品

点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。

参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。