β-catenin 的三个位置，三种结论
14/Beta-Catenin 克隆，250 µg/mL 原液
结直肠癌的切片染完，肿瘤细胞从膜到胞质都是棕的，核里也有。学生写报告说核转位阳性，比例六成。
复核的时候数了一遍，真正的核阳性不到两成。其余的棕色，在胞质里。
一个蛋白，三种定位，三种含义
β-catenin 是 92 kDa 的蛋白，在细胞里有三个去处。
在黏附连接处，它和 E-cadherin 的胞内段结合，通过 α-catenin 连到肌动蛋白骨架上，管的是细胞黏附。
在胞质里，它被 APC、Axin、GSK3β 组成的降解复合物磷酸化，送去泛素化降解，水平维持得很低。
在核里，它作为转录共激活因子，和 TCF/LEF 家族结合，启动下游基因。这一步是 Wnt 通路被激活的标志。
膜上的信号说明结构还在，胞质的信号说明降解被压住，核里的信号才说明通路开了。三者不能互相替代。
免疫原在 C 端，浓度与保存
产品页写的免疫原是小鼠 β-catenin 的 571 到 781 位氨基酸。
这一段落在 armadillo 重复区的后半部分。armadillo 重复是 β-catenin 和多种伙伴蛋白结合的结构域，包括 TCF、APC、E-cadherin。
用这一段做免疫原，抗体识别的表位在蛋白的中后段。这个位置的好处是，进入核内的 β-catenin 同样带着这一段，抗体能认上。
做免疫沉淀的时候要留意，抗体结合的位置如果正好是某个伙伴蛋白的接触面，复合物可能被拆开。
判读要分三遍
第一遍低倍看整体。肿瘤组织和正常黏膜的染色模式差别很大，先看结构。
第二遍高倍看膜。正常上皮的膜线连续，肿瘤里常出现斑片状缺失。
第三遍专门数核。核阳性的标准是核内的信号强于同一细胞的胞质，且核轮廓清楚。核仁处通常是暗的。
三遍分开做，不要一边看一边下结论。混在一起看的时候，胞质的背景会把核的信号衬得更高。
原液 250 µg/mL，浓度高，稀释空间大。亲和层析纯化，缓冲液含 BSA、甘油和不超过 0.09% 的叠氮钠。
储存写的是负二十度，原液不稀释直接放。甘油在配方里，冻融对它的影响比无甘油配方小，但仍然建议分装。
反应种属是人、小鼠、大鼠、鸡、狗。应用有 WB、IHC、IF/ICC、IP 四项。
三条操作建议
IHC 修复用 Tris-EDTA pH 9.0，微波十五分钟。核内表位要修透，修复不足的时候核信号出不来。
ICC/IF 固定后用甲醇处理五分钟，同时完成固定和透化。β-catenin 在膜上的分布对固定方式敏感，多聚甲醛固定后膜信号容易变成颗粒。
WB 跑 92 kDa 附近。样本里如果有明显的降解带，先查裂解液里有没有加足够的抑制剂。
下次数核阳性，拿一张只染了二抗的切片并排看，把自发荧光和非特异吸附先扣掉。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog |
| 抗原名称 | β-Catenin |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC, IP |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Mouse IgG1 |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | affinity chromatography |
| 储存条件 | Store undiluted at -20°C. |
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