同一个靶点，多抗该怎么用

NRF2 多抗，免疫原覆盖 256 到 605 位

同一个实验室，两支抗 Nrf2 的抗体，一支染出来核很清楚，另一支几乎没信号。样本是同一批切片，修复条件也一样。

查下去发现，两支的免疫原落在蛋白的不同区段。区段不同，能认上的表位就不同，染色结果跟着不同。

多抗的识别面比单抗宽

这支是兔多克隆抗体，免疫原是大肠杆菌表达的重组人 NRF2，片段落在 256 到 605 位氨基酸，带 GST 标签。

多抗来自多个 B 细胞克隆的混合，识别的是免疫原上的多个表位。好处是信号强，某个表位被固定破坏，别的表位还能结合。坏处是批次之间的表位偏好会有差异。

256 到 605 这一段覆盖 NRF2 的 Neh4 和 Neh5 反式激活域，以及部分 Neh6。这几个区域富含丝氨酸和苏氨酸，是磷酸化调控的集中地带。

磷酸化状态改变之后，抗体对某些表位的亲和力会变。做磷酸化相关的研究，这一点要考虑进去。

三个应用，判读方式不同

WB 看的是条带位置和强弱。NRF2 的理论分子量在 68 kDa 附近，实际跑胶常在 95 到 110 kDa 之间，原因是富含酸性氨基酸和磷酸化修饰，迁移偏慢。

IHC 看核染色。正常组织里 NRF2 主要在胞质，核内弱。氧化应激或者药物处理之后，核内信号增强。

ICC/IF 和 IHC 的判读逻辑一样，先看核，再看胞质，两个区室的比值才是判据。

ELISA 用这支的时候，要确认检测的是天然构象还是变性后的蛋白。多抗对变性蛋白的识别通常更好，夹心法里的配对需要单独验证。

种属只有一个，取用也别乱放

反应种属写的是人。

做小鼠或者大鼠的样本，这支不能直接套。NRF2 在物种间的序列保守度不低，但多抗的表位分布在免疫原那一段，跨种属的时候哪几个表位还在，说不准。

真要跨种属用，先跑一张阳性组织，和一个已知的阳性样本并排。没有阳性信号，就换一支明确写了鼠源的。

缓冲液是 PBS 加 0.02% 叠氮钠和 50% 甘油，pH 7.3，负二十度存放，一年内稳定。

说明书里写了一句，负二十度存放不必分装。甘油把冰点压低了，反复取用对效价的影响小。

纯化方式是抗原亲和纯化，比 Protein A 纯化的抗体更干净，非特异条带少。

三条操作建议

WB 的胶配 8%。100 kDa 附近的蛋白，浓度高了进不去，跑出来挤在浓缩胶界面。

IHC 的修复用 Tris-EDTA pH 9.0。核内表位对修复强度要求高，柠檬酸缓冲液常常不够。

染核的时候带一张不加一抗的切片。多抗的非特异结合比单抗多一些，阴性对照能帮你划出背景线。

下次换抗体之前，先看两支的免疫原区段是否重叠。重叠的部分，就是两支都能认的地方。

关键参数

反应种属	Human
抗原名称	NRF2
验证应用	WB, IHC, ELISA, IF/ICC
偶联标记	Unconjugated
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Polyclonal
纯化方式	Antigen affinity purification
储存条件	Store at -20°C. Stable for one year after shipment. Aliquoti

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品牌	货号	品名
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