高尔基体染成散点，先看固定液

GM130 小鼠单抗，四种属，四项应用

HeLa 做免疫荧光，GM130 该在核旁一坨紧密的带状，贴着细胞核的凹面。染出来碎成十几个小散点，撒在胞质里。

学生怀疑抗体不认。看了固定这一步，用的是预冷的甲醇，直接倒进培养皿。

高尔基体是对固定最敏感的细胞器之一。冷、渗透压变化、机械剪切，任何一样都能让它散成小泡。散了之后蛋白还在，形态没了。

高尔基体为什么容易碎

它是一摞扁囊，靠微管和基质蛋白维持堆叠。没有膜骨架撑着，形态完全依赖固定瞬间的状态。

甲醇固定快、穿透好，但脱水收缩明显。4% 多聚甲醛温和，对膜结构友好，代价是穿透慢。

做高尔基体，PFA 更稳。固定前用温的 PBS 洗一遍，别让细胞碰到冷液体。

铺片的密度也有关系。细胞长得太满，固定液渗不透中间那一层，中心区域的高尔基体会比边缘散得厉害。

这支的事实

小鼠单抗，IgG1 κ 亚型，未标记。反应种属写了人、小鼠、大鼠、狗四个。

应用四项，WB、IHC、IF/ICC、IP。产品页没有给固定稀释比。

这支来自 BD Transduction Laboratories 系列，靶点是高尔基体基质蛋白，定位在顺面高尔基体。这个位置判读时有用，顺面靠核，反面朝外。

GM130 在分裂期会被磷酸化，高尔基体随之解体成小泡，分到两个子细胞里再重建。做同步化实验时，这个现象会被当成染色失败。

IP 的时候注意重链

IgG1 κ 做 IP，重链落在五十 kDa 附近。目的蛋白也在这个位置的话，还原胶上会重叠，分不清。

办法有两个。用交联把抗体固定在珠子上，跑胶前不洗脱抗体；或者用带标签的构建，检测时走标签通道。

轻链在二十五 kDa 附近。做小分子量蛋白的 IP，同样要留意这一条。

建议

固定用 4% PFA，室温十分钟，PBS 洗三遍再透化。透化用 0.1% Triton X-100，五分钟够了，时间长了高尔基体也会散。

一抗孵育前先封闭三十分钟，用含 5% 正常血清的缓冲液。

判读时先看核旁那条带状结构在不在。散点状的信号就算亮度够，也不算阳性。

铺片前把盖玻片做一次酸洗。残留的培养基和血清蛋白在固定时会被一起交联到细胞表面，抗体非特异结合上去，看着像胞质染色。一抗稀释液里加 0.1% 的皂苷对穿透有帮助，但高尔基体在膜内，浓度不宜再高。

下次做高尔基体，固定液提前放到室温，别用刚从四度柜里拿出来的。

关键参数

反应种属	Human, Mouse, Rat, Dog
抗原名称	GM130
验证应用	WB, IHC, IF/ICC, IP
偶联标记	Unconjugated
宿主/亚型	Mouse IgG1, κ
抗体类型	Monoclonal
纯化方式	affinity chromatography

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品牌	货号	品名
BD Pharmingen	610822	BD Transduction Laboratories™ Purified Mouse Anti-GM130 本文产品
BD Pharmingen	610823	BD Transduction Laboratories™ Purified Mouse Anti-GM130
Abcam	Ab52649	Anti-GM130 antibody [EP892Y] - cis-Golgi Marker
Abcam	Ab30637	Anti-GM130 antibody - Drosophila Golgi/Cis-Golgi Marker

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