CD63 的带本来就是一片
CD63 兔单抗，人源，WB 1/1000 起
外泌体裂解液跑 CD63，预期是胶中下部一片弥散。跑出来一条边缘整齐的单带，学生说这次终于漂亮了。
CD63 是四次跨膜蛋白，胞外环上有多个糖基化位点。糖链长度不一，同一批样品在胶上就是一片。
整齐的单带，往往说明糖基化被抹平了。样本处理里如果有强变性或者长时间煮沸，聚集体形成，跑出来反而像一条锐带。
弥散才是常态
CD63 在细胞内分布很广，晚内体、溶酶体、多囊体、质膜上都有。不同区室的糖基化程度不同，混在一起就是弥散。
做外泌体鉴定，CD63 常和 CD9、CD81 一起看。三个都是四跨膜蛋白，单看一个容易把非外泌体的膜组分算进去。
带型弥散不等于杂。位置对、上下不超过一截，就是正常的。
判断是不是过载，看带的上沿。上沿发黑、往下拖着一条尾巴，说明上样量超了；上下缘都还算清楚，只是中间宽，那是糖基化的正常分布。
这支的事实
克隆号 EPR5702，兔单抗，IgG，标签直接写的是晚内体标志物。
反应种属只写了人。做小鼠或者大鼠的样本，要自己先跑阳性对照，不能直接套。
应用两项，WB 和 IHC。IHC-P 的稀释是 1/2000，未纯化的上清用 1/250 到 1/500。WB 的范围宽，1/1000 到 1/10000。
只有两个应用说明验证的范围窄。做流式或者免疫荧光，得先自己摸条件，不能拿 WB 的数直接套。
稀释比怎么落
外泌体样品的 CD63 丰度高，取高端，1/5000 到 1/10000。细胞全裂解液取 1/1000。
组织切片取低端，1/2000 按纯化抗体的浓度配。上清不纯化的时候浓度低，按 1/250 到 1/500 走。
一支抗体两种形态，稀释表要分开记。看浓度还是看稀释比，先确认手上是哪一管。
建议
跑胶用梯度胶。CD63 的带偏宽，普通胶分不开糖基化不同的那一群。
上样量不要贪。外泌体样品浓度高，每孔十微克就够，过载会让弥散带糊成一片黑。
IHC 做组织时，修复液先试 EDTA。四跨膜蛋白的胞外环对热修复的耐受性一般。
做外泌体鉴定，三支抗体一起跑，两张膜各显一次。只出一支的样品，宁可重提一次，别急着下结论。
如果样品是从培养上清浓缩来的，先跑一管不含外泌体的对照。血清里本身就有 CD63 阳性的膜泡，不换无血清培养基，背景永远是高的。抗体稀释液用含 1% BSA 的 PBS，别用脱脂奶，奶里的脂质在胶片上会出斑点。
下次看到那条整齐单带，先查一遍煮沸时间，超过十分钟就重跑一管。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | CD63 |
| 验证应用 | WB, IHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/2000 For unpurified use at 1/250 - 1/500.；WB 1/1000 - 1/10000 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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