p65 做小鼠，抗体说明书先说了
p65 兔单抗，IHC-P 1/5000，效价高
小鼠肝组织跑 p65，1/1000 孵育过夜，目的位置空的。同一批人细胞用同样的条件，带很清楚。
学生换了一支新抗体，还是空的。翻说明书，看到一行小字，这支在小鼠组织中可能检测不到目的条带，IP 对小鼠样本不做保证。
买这支之前，这一行该先看。
一个抗体两个种属，能力不一样
说明书上写的种属范围是人、小鼠。但验证深度不一样，人源样本做得透，小鼠只做了有限验证。
这种情况在单抗里常见。免疫原是人源片段，小鼠的同源序列差几个残基，表位就用不上了。
做小鼠模型又要用这支，只能自己先跑阳性对照。肝、脾、肺都试一遍，还是空就换货号。
还有一个变量是刺激。p65 在静息细胞里量本来就少，不刺激直接跑，人源样本也可能弱。先确认阳性对照能出带，再怀疑种属。
这支的事实
克隆号 E379，兔单抗，IgG。反应种属人、小鼠。
应用四项加 IP，WB、IHC、IF/ICC、IP。IHC-P 1/5000，柠檬酸 pH 6 热修复。ICC/IF 1/100，未纯化用 1/250 到 1/500。IP 1/30，未纯化用 1/200。
稀释比的跨度说明了什么
WB 的范围写的是 1/1000 到 1/100000。一百倍。这个跨度说明效价很高，也说明不同样本的丰度差得远。
IHC-P 1/5000 单独看是个很稀的数。组织切片的孵育体积小，实际用量并不低。
配液时按十倍梯度走。1/1000 出背景就跳到 1/10000，不要一次跨两个数量级。
稀释到十万倍的时候，缓冲液的成分比浓度更关键。盐浓度高的缓冲液会让非特异结合变多，看着像抗体不纯。
建议
p65 的激活看的是核转位，不是总蛋白量。WB 跑全裂解液只看到总量，要判激活得做核质分离。
IHC 判读看核。静息状态下 p65 在胞质，激活后进核。核内阳性细胞的比例比染色深浅更有意义。
IP 用 1/30，这个比例偏高。裂解液的去垢剂浓度和盐浓度要一起调，否则非特异条带会盖住目的带。
做核质分离，胞质组分的纯度要验。用一两个胞质标记跑一下，核里混进胞质，p65 的定位结论就站不住。
买之前可以直接问供应商要一份小鼠样本的验证图。拿不出来，就当没做过，自己先跑。IHC 的 1/5000 出背景时，先把孵育从过夜改成室温一小时，再考虑调浓度。
下次买 p65，先确认样本种属。人源样本可以放心用，小鼠样本先问清有没有做过验证。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse |
| 抗原名称 | Rela |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC, IP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/5000 Perform heat-mediated antigen retrieval with citrate buffer pH 6 before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/1000 - 1/100000 This antibody might not detect target band in mouse tissues.；ICC/IF 1/100 For unpurified use at 1/250 -1/500.；IP 1/30 For unpurified use at 1/200. We do not guarantee IP for mouse. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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