血管壁染得漂亮，纤维间隔是空的
α-SMA 兔单抗，IHC-P 1/1000 到 1/2500
纤维化模型的肝切片，α-SMA 染出来血管壁一圈深棕，很漂亮。纤维间隔里那些梭形的肌成纤维细胞，一个都没出来。
学生说同一张片子，血管染得好说明抗体没问题。
血管壁的平滑肌细胞表达量高，活化的肌成纤维细胞低一个量级。1/2500 的稀释只够把前者染出来。
两种细胞，两种丰度
ACTA2 编码的是平滑肌肌动蛋白，构成应力纤维。血管中膜的平滑肌细胞里，它占细胞总蛋白的相当比例。
肌成纤维细胞是活化的成纤维细胞，也表达这个蛋白，但量少，分布更弥散。
做纤维化定量，靶的是后者。染色条件要按低丰度的那群细胞来定。
肌成纤维细胞的另一个特征是同时表达胶原。单看 α-SMA，容易把周细胞也算进去。配一个胶原或者纤连蛋白的标记，定位更准。
这支的事实
克隆号 EPR5368，兔单抗，IgG。反应种属人、小鼠、大鼠。
应用四项，WB、IHC、FCM、IF/ICC。IHC-P 1/1000 到 1/2500，柠檬酸 pH 6 热修复。ICC/IF 1/250 到 1/500。
流式做胞内染色 1/100 到 1/200，同型对照是 ab172730。WB 1/10000 到 1/50000，未纯化用 1/1000。
流式做胞内染色
ACTA2 是胞内蛋白，要先固定再透化。固定用 4% PFA，透化用 0.1% 的皂苷或者 Triton。
透化过度会让肌动蛋白丝断裂，染色变成弥散的胞质信号。时间控制在十分钟。
同型对照必须带。胞内染色的背景比表面染色高，不带对照分不清阳性和非特异。
建议
做纤维化定量，稀释往 1/1000 走。血管壁会过染，但纤维间隔能出来，判读时把血管排除掉就行。
图像分析按面积算阳性比例，不要按亮度。肌成纤维细胞的信号弱，按亮度阈值会漏掉一半。
WB 的稀释比很高，1/10000 到 1/50000。配液用两步稀释，中间加载体蛋白。
取材的位置要统一。纤维化在包膜下和中央区的程度不一样，同一批片子取自同一叶，数据才可比。
WB 上主带下方常有一条弱带，那是被切的片段，不影响定量，但别把它当成第二种蛋白。做双标尽量都走荧光通道，棕色显色和红色荧光不好区分。纤维化的整体分级可以另做一张天狼星红，α-SMA 只用来定位活化的细胞。
下次染纤维化片子，先在低倍下找纤维间隔的位置，再推到高倍确认梭形轮廓，血管不在计数范围里。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | ACTA2 |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/1000 - 1/2500 Perform heat-mediated antigen retrieval with citrate buffer pH 6 before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/10000 - 1/50000 For unpurified use at 1/1000.；ICC/IF 1/250 - 1/500；Flow Cyt (Intra) 1/100 - 1/200 ab172730 - Rabbit monoclonal IgG, is suitable for use as an isotype control with this antibody. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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