产品性能解析 · BD Pharmingen

E-cadherin 的带，半小时就淡了

E-cadherin 小鼠单抗，四种属，120 kDa

BD Pharmingen · 货号 610182

上皮细胞做钙去除实验，EDTA 加了半小时，E-cadherin 的带已经淡了一半，细胞形态在镜下还看不出变化。

学生说形态没变，是不是还没到时候。

蛋白层面的变化比形态早。E-cadherin 的功能依赖钙，去掉钙，分子先失活再被降解。

钙依赖是什么意思

E-cadherin 是 120 kDa 的跨膜糖蛋白，胞外域由几个重复结构组成，重复之间夹着钙离子。

钙在的时候，胞外域是刚性的，能和相邻细胞的同名分子咬合。钙一走，结构域松脱，蛋白酶就能切。

黏着连接靠这个咬合维持。分子没了，连接自然散，但细胞骨架的重排要更久才看得出来。

这也解释了为什么钙去除实验的时间点要密。半小时开始掉，两小时可能就掉到底，中间那段才是有效的观察窗口。

小鼠单抗，IgG2a κ 亚型，未标记。反应种属人、小鼠、大鼠、狗。

应用四项，WB、IHC、IF/ICC、IP。产品页没有给固定稀释比。

靶点定位写的是黏着连接，通过胞质的 catenin 蛋白连到细胞骨架。判读时看的是细胞间的接触面，不是整个胞膜。

四种属里含狗，做犬源细胞系的实验用得上。这个种属在同类抗体里覆盖得不算多。

IgG2a 的重链在五十 kDa 附近。做 IP 之后跑 WB，如果用同样的二抗体系，这条重链会一起显色。

E-cadherin 的 120 kDa 主带不受影响，但它的降解片段可能落进那个区间。

解决要么交联，要么用不同种属的二抗做检测。

做钙去除实验，取样时间点密一点。半小时、一小时、两小时各收一管，别只看终点。

WB 上除了 120 kDa 的主带，注意下方有没有小片段。有，说明蛋白酶在切。

IF 判读看细胞间的线。上皮细胞铺满后，E-cadherin 该在接触面上连成线，胞质里空着。

加钙回补做一组。去掉钙再补回来，信号能恢复多少，比单看下降更能说明问题。

做 IF 时细胞要铺到汇合。没长满的时候接触面少，E-cadherin 的信号自然弱，会被当成表达下降。裂解液里补 1 mM 氯化钙能减少提取过程中的降解。用这支拉复合物还能带下 catenin，检测时跑两块胶，一块看 E-cadherin，一块看 catenin。

下次做这个实验，同时收一份 RNA。蛋白掉了不代表转录掉了，两个层面分开看。

品牌	货号	品名
BD Pharmingen	610182	BD Transduction Laboratories™ Purified Mouse Anti-E-Cadherin 本文产品
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