GAPDH 别用牛奶封闭
GAPDH 小鼠单抗，八个种属，0.1 到 1 µg/mL
同一个样跑两块胶，一块用 5% 牛奶封闭，一块用 5% BSA。牛奶那块 GAPDH 几乎白的，BSA 那块带很清楚。学生说这两块胶是同一管样品。
这支抗体的说明书里有一句加粗的话，WB 不要用牛奶封闭，实验室测过，牛奶会明显压低信号，推荐 5% BSA 封闭一小时。
牛奶里到底有什么
脱脂奶粉的主要蛋白是酪蛋白，一种磷酸蛋白。对一些磷酸化抗体，酪蛋白本身就是竞争抗原。
对 GAPDH 这支，牛奶的问题不在交叉反应，在封闭效率。厂家给的对照图里，牛奶组的信号掉得很明显。
不同批次的奶粉成分有差异，同一实验室换一个牌子，结果可能就变了。这也是推荐 BSA 的一个实际原因。
还有一层。牛奶封闭的膜如果洗不干净，残留的酪蛋白会在显色时形成一片雾，看着像背景高，其实是封闭液没冲掉。
这支的事实
克隆号 mAbcam 9484，小鼠单抗，IgG2b 亚型，标签写的是内参。
反应种属八个，人、小鼠、大鼠、鸡、猪、牛、仓鼠、非洲爪蟾。跨物种的范围是这支最实用的地方。
应用两项，WB 和 IHC。WB 0.1 到 1 µg/mL，IHC-P 5 µg/mL。
单位是浓度不是稀释比
这两栏写的是 µg/mL，不是 1/1000 这种比例。实际配液要按体积换算。
一支 100 µL 的抗体，浓度写在管子上。要配十毫升 0.5 µg/mL 的工作液，先算需要多少微克，再换算成微升。
很多人按稀释比记，换一批浓度不同的货号就出问题。记浓度更稳。
IHC 的 5 µg/mL 是 WB 上限的五倍。做组织切片时，这个浓度下背景主要靠洗涤控制，不是靠降浓度。
建议
封闭用 5% BSA，室温一小时。不要图省事用牛奶，这支的信号会被压掉一半以上。
做跨物种的比较实验，八个种属覆盖了常见模型。鸡和爪蟾的样本也能用同一支，省一次采购。
内参的带要落在曝光的线性范围内。带太黑说明上样过量，内参就没法用来校平，稀释一倍重跑。
八个种属可以做跨物种比对，但每个种属的丰度不同。肝和肾的 GAPDH 高，血清里几乎测不到，选样本时留意。IHC 做内参，染出来该是所有细胞的胞质均匀着色，有一片不着，多半是固定不均。按膜面积算用量比按张数估准，大膜要往上限走。
封闭液配好当天用。5% BSA 放两天就长菌，表面一层浑浊，涂到膜上背景更高。配的时候加 0.02% 的叠氮钠，四度能存一周。
下次配 GAPDH，把浓度写在管盖上，别只写稀释比。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Bovine, Hamster, Xenopus laevis |
| 抗原名称 | GAPDH |
| 验证应用 | WB, IHC |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG2b |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 推荐稀释 | IHC-P 5 µg/mL Perform heat-mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.；WB 0.1-1 µg/mL Do not block with milk. Block with 5% BSA for 1 hour. Our labs have thoroughly investigated the blocking conditions for this antibody. We found that milk significantly decreases the signal and is therefore not a suitable blocking agent for this antibody (see images). |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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