BCL2 的带没动，不代表没变化

BCL2 兔多抗，人源，六项应用

凋亡诱导十二小时，BAX 的带明显深了，BCL2 的带几乎没动。学生问是不是这支抗体不敏感。

BCL2 的抗凋亡功能，主要不靠量的变化。它和 BAX 形成异二聚体，两者的比值决定线粒体外膜的通透性。

比值变了，功能就变了，总量可能一点没动。

图 1　Western blot 验证结果（图源：proteintech 官网产品页）

看比值不看单条带

促凋亡和抗凋亡的蛋白成对存在。BCL2 多了，把 BAX 扣住，细胞不死；BAX 多了，寡聚化打孔，细胞色素 c 出来。

所以 WB 上要两条带一起看。同一张膜上跑 BAX 和 BCL2，或者同一批样跑两块胶。

只跑一条，看到没变化就下结论，容易把方向搞反。

两块胶的曝光要一致。分开跑的时候，总曝光时间不同，比出来的比值没有意义。先定内参，再比目的带。

这支的事实

兔多克隆，IgG，未标记。反应种属只写了人。

应用六项，WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC、IP。产品页没有给固定稀释比。

靶点定位写的是线粒体外膜。判读 IF 时看的是胞质里的点状或网状信号，和线粒体标记的重合度。

六项应用里含 ELISA 和 IP。前者做定量，后者拉内源复合物，两者的用量逻辑和 WB 不同。

只有人源这一条

种属一栏只写人。做小鼠模型的话，这支能不能用要自己试。

BCL2 在不同物种间的保守度中等，表位差几个残基就可能失效。先跑一管小鼠的阳性对照，出带再用。

多抗的批间差异也要考虑。换批后稀释比重新定，不要沿用上一批。

建议

WB 上样量控制在二十微克。BCL2 的丰度在多数组织里不高，上样太多只会让背景一起上来。

IF 配线粒体标记一起染，重合度低的时候先怀疑固定，别先怀疑抗体。

IP 用这支拉内源蛋白，裂解液要温和，1% Triton 比 SDS 合适。

做凋亡的时间曲线，别只看一个点。BCL2 的下降常常出现在早期，到后期细胞已经死掉，信号反而看不出差别。

BCL2 的磷酸化状态影响功能，做功能判断时，除总量和比值，可以再加一个磷酸化位点的检测。线粒体组分提取能提高信噪比，全裂解液里 BCL2 的比例低，富集之后带清楚很多。IHC 用这支看滤泡性淋巴瘤的染色模式，胞质网状着色，和反应性生发中心的强阳性不同。时间曲线至少四个点，别用单个点下结论。

下次做凋亡，把 BAX 和 BCL2 放同一张膜上跑。比值算出来，比看单条带靠谱。

关键参数

图 2　Western blot 验证结果（图源：proteintech 官网产品页）

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