线粒体内参，五个物种
ATP5A 鼠单抗，WB 按 1 µg/mL
做线粒体分离，想确认胞质组分有没有被线粒体污染。跑 ATP5A，胞质那几管也有条带。
按线粒体标记的思路，胞质里应该是干净的。查分离记录，匀浆转速和时间都按流程走的。
问题在上样量。胞质蛋白浓度高，每孔上了四十微克，线粒体那几管只有十微克。内参的强弱不能直接跨组分比较。
它是 ATP 合酶的亚基
ATP5A 是 ATP 合酶 F1 复合物的 α 亚基，定位在线粒体内膜。细胞里所有需要 ATP 的地方都靠它。
含量高、表达稳，所以常被拿来做线粒体的内参，用来证明「这一管确实有线粒体」。
做线粒体自噬、做分离纯度验证、做线粒体蛋白归一化，都用得上。
它的表达在多数组织里很稳，做内参合适。但稳不等于不变，线粒体数量大幅变化的时候，它也会跟着动。
这支的事实
克隆号 15H4C4，小鼠单抗，IgG2b。反应种属写了人、小鼠、大鼠、牛、果蝇五个。
应用四项，WB、IHC-P、FCM、IF/ICC。稀释给的是浓度不是比例，WB 1 µg/mL，IHC-P 1 µg/mL，ICC/IF 1 到 10 µg/mL，流式 1 µg/mL。
按微克算这一点要注意。抗体原液的浓度标在管子上，配之前先看一眼，别按习惯按 1/1000 兑。
五个种属里有果蝇，做遗传学模型的可以直接用。
稀释方式跟别人不一样
多数一抗给的是稀释比，这支给的是终浓度。两者换算要用原液浓度，原液浓度不同的批次，同一个比例对应的终浓度不一样。
WB 1 µg/mL 是个偏高的浓度。常规一抗的终浓度常在 0.1 到 0.5 µg/mL 之间，这支要高一些，说明它的亲和力不算特别强。
ICC/IF 的 1 到 10 µg/mL 跨度十倍。做线粒体形态的用低端，做共定位定量的用高端。
流式用 1 µg/mL，同时说明书推荐了同型对照的货号，做流式的时候一起配上。
换算法之后，配液单上最好同时写浓度和体积，复核时一眼能看出对不对。
三条操作建议
做组分比较时，每个组分上样量按总蛋白定量后统一，别按体积上。不同组分的蛋白浓度差几倍很正常。
IHC-P 修复用柠檬酸 pH 6.0，热修复。线粒体抗原对修复条件不挑，但修复不足信号会弱。
做流式检测线粒体含量，先做同型对照管。小鼠 IgG2b 的非特异结合不算低，没有对照分不清。
下次配这支，拿计算器按终浓度算体积，写在配液单上，别用稀释比估。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Bovine, Drosophila |
| 抗原名称 | ATP5F1A |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG2b |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 推荐稀释 | IHC-P 1 µg/mL Perform heat mediated antigen retrieval with citrate buffer pH 6 before commencing with IHC staining protocol.；WB 1 µg/mL；ICC/IF 1-10 µg/mL；Flow Cyt 1 µg/mL ab170192 - Mouse monoclonal IgG2b, is suitable for use as an isotype control with this antibody. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 +4°C |
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