Bcl-2 染在胞质

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Bcl-2 染在胞质

Bcl-2 兔多抗,只写人,三项应用

Abcam  ·  货号 Ab59348

Bcl-2 染在胞质

淋巴瘤切片染 Bcl-2,判读的时候有人指着核里的深色颗粒说这是强阳性,有人坚持只看胞质。

两个人说的其实是两种东西。Bcl-2 定位在线粒体外膜和内质网膜上,核里没有它的功能位点。

核染得深,多半是复染的苏木素,或者是抗体浓度高带来的非特异。

免疫组化 验证结果
图 1 免疫组化 验证结果(图源:Abcam 官网产品页)

它守在线的外膜上

Bcl-2 是抗凋亡蛋白,主要作用是把线粒体外膜的通透性压住,阻止细胞色素 c 释放。

它不直接结合 DNA,也不进核。所以染色图样应该是胞质的、颗粒状的,常常偏向核周。

这个定位特点在判读里很实用。胞质成团的棕色算阳性,核里发黑不算。

它跟 Bax 是一对。Bcl-2 高、Bax 低,细胞偏向存活;反过来偏向凋亡。做凋亡实验两个一起跑才有意义。

这支的事实

兔多抗,IgG,不带标记。反应种属只写了人一个。

应用列了三项,WB、IHC、IF/ICC。没有流式,做悬液检测得另找货号。

产品页里这一支的说明很简,除了一句负二十度保存一年,没有更多技术参数。稀释比也没给。

这种情况下,条件只能自己摸。多抗的批间差异在这里更要注意,换批之后要重新对一次图样。

没有流式这一项,做悬液检测得换货号。挑之前先看应用列表,别买回来才发现做不了。

只写人能推到哪一步

Bcl-2 在小鼠和大鼠里也有同源蛋白,序列有保守区。但抗体能不能识别,产品页没做承诺。

做小鼠模型的时候,最稳的做法是拿已知阳性的小鼠组织先跑一张 WB。有条带、位置对,再拿去染切片。

跑不出来别急着换货号,先确认裂解和上样量。Bcl-2 在很多正常组织里表达不高,阴性也可能是真阴性。

人的扁桃体是做阳性对照的好材料,生发中心阴性、套区阳性,这个对比很清楚。

只写人还有一个后果,别人的图样不能直接照搬。条件跟你的样本未必对得上。

三条操作建议

WB 从 1/1000 起,产品页没给数字。Bcl-2 有条带位置上的近亲,判读时用阳性对照泳道对位置。

IHC 修复用 EDTA pH 9.0,柠檬酸对这支的效果通常弱一些。浓度从 1/200 起试。

IF 拍图时把胞质信号和核染分开分析,别整个视野算平均强度。

切片厚度也影响判读。四微米的片子胞质层次清楚,切厚了叠加在一起,看着像胞质满染。

下次判读,把「胞质颗粒状」写进判读标准的第一条,核染色明确排除,两个人才数得一致。

关键参数

反应种属 Human
抗原名称 BCL2
验证应用 WB, IHC, IF/ICC
宿主/亚型 Rabbit / IgG
抗体类型 Polyclonal
纯化方式 Affinity purification Immunogen
储存条件 短期 +4°C;长期 -20°C
免疫组化 验证结果
图 2 免疫组化 验证结果(图源:Abcam 官网产品页)

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品牌 货号 品名
Abcam Ab59348 Anti-Bcl-2 antibody 本文产品
proteintech 12789-1-AP human BCL2 Polyclonal antibody
proteintech 68103-1-Ig Bcl2 Monoclonal antibody
proteintech 60178-1-Ig BCL2 Monoclonal antibody

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