大鼠肾小管也会亮，别急着判

兔单抗，IHC-P 1/2000，肾组织有提示

大鼠肾切片做 CD31，皮质区血管染得漂亮，但小管上皮的胞质也有一层浅浅的棕色。

第一判断是抗体浓度高了，按 1/1000 稀释重做，小管还是亮。

产品页的 IHC 说明里写着，在他们手上观察到过大鼠肾小管细胞的非特异胞质染色。这是抗体本身的行为，不是操作失误。

为什么要稀释到 1/2000

CD31 在内皮细胞膜上密度很高，血管丰富的组织里抗原量本来就大。

浓度高一点，抗体就会去找那些亲和力低一点的位点，背景跟着起来。

1/2000 这个稀释比不是保守，是为了把非特异压下去。做多标的时候给到 1/4000，同一支抗体可以更稀。

另一个变量是切片厚度。三微米和五微米的片子上，同样的浓度染出来差一档，同批比较要用同一厚度。

这支的事实

兔单抗，克隆号 EPR17259，IgG，无标记，Protein A 纯化。

种属写了人、小鼠、大鼠。应用列了 IHC-P、IHC-FoFr 和 mIHC 三项。这支不做 WB，也不做流式。

稀释比给得细。IHC-P 1/2000，mIHC 1/4000，冰冻切片 IHC-FoFr 1/200。

产品页给了固定时间建议，18 到 24 小时适合多数样本。阳性对照推荐人肺组织。

缓冲液 pH 7.2，含 40% 甘油和 0.05% BSA。

判读时容易错的地方

血管内皮是连续的膜染色，小管上皮是胞质弥漫染色。形态上能分开，低倍镜下容易混。

阳性对照选人肺，肺泡间隔的毛细血管网密集，染出来最容易判断。

做肾、肝这类代谢器官，建议同时染一张正常肺或者正常扁桃体做阳性对照，把真信号的样子记住。

做多标的时候把 CD31 放在第一个通道，后面的步骤会洗掉一部分膜抗原，先染内皮更稳。

固定时间影响染色强度。组织块大的样本，18 小时不够，切片边缘和中心会出现色差。

冰冻切片用 1/200，浓度是石蜡切片的十分之一，两种样本的处理条件不能互换。

切片厚 3 µm，太厚细胞叠在一起，血管腔的边界看不清。

拍片时的曝光也要固定。不同曝光下的棕色深浅没法直接比，同一批片子用同一组参数拍完再分析。

三条操作建议

IHC-P 从 1/2000 起，如果信号弱再往 1/1000 走，别一上来就加浓。

修复用 EDTA pH 9.0，微波二十分钟，内皮膜染色在修复不足时最容易丢。

mIHC 做多重，1/4000 打底，每个通道单独跑一遍再合并。

下次切肾，取皮质和髓质交界处，血管密度稳定，判读省事。

关键参数

反应种属	Human, Mouse, Rat
抗原名称	Pecam1
验证应用	IHC, IF-FRO, MIHC
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Monoclonal
纯化方式	Affinity purification Protein A
推荐稀释	IHC-P 1/2000 In our hands we observed non-specific cytoplasmic staining on tubular cells in rat kidney. The ideal fixation time will depend on the size of the tissue block and the type of tissue, but fixation between 18–24h is suitable for most samples. Positive Control: human lung tissue. Perform heat-mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.；mIHC 1/4000；IHC-FoFr 1/200
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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