21 kDa，胶要跑得够浓
兔多抗，CD3ε，IHC-P 与 WB
人扁桃体切片做 CD3，滤泡间区的 T 细胞染得很清楚，生发中心基本空白。
同一批样本做 WB，跑到胶的最下面才看到那条带。
21 kDa。用 10% 的胶跑，这条带会挤在染料前沿附近，和杂质分不开。
CD3ε 是什么位置
CD3 是 T 细胞受体复合物的信号模块，由几条链组成，ε 链是其中之一。
它有一段跨膜区，胞外段不长，胞内段带免疫受体酪氨酸激活基序，负责把抗原识别的信号往胞内传。
这支的免疫原是人 CD3E 的 150 到 200 位合成肽段，属于胞内段附近。
产品页没写免疫原在胞内还是胞外，做活细胞标记前先确认，通透步骤不能省。
ε 链要和 CD3 的其他链组装才能上膜，单独表达会被降解。做构建的时候，几条链一起转。
这支的事实
兔多抗，IgG，无标记，亲和纯化。产品页标注分子量 21 kDa。
种属写了人、小鼠、大鼠。应用只有 IHC-P 和 WB 两项。
免疫原写的是合成肽段，具体序列是 proprietary，UniProt 号 P07766。
缓冲液里没有甘油，反复冻融容易沉淀，到货后先分装。
缓冲液是 PBS，pH 7.4，含 0.05% 叠氮钠。储存条件写的是 4°C，不要冻。
产品页没有给稀释比。
只有两项应用，能做什么
没有 IF，没有流式，也没有免疫沉淀。做悬浮细胞或者活细胞标记，这支不合适。
做组织切片和裂解液检测，它够用。T 细胞在组织里的分布，IHC 是最直接的读法。
做 WB 时 T 细胞占比决定信号强弱，脾和胸腺直接裂解就够，实体瘤要先富集淋巴细胞。
非要做流式，只能先试表面染色。产品页没有验证过，结果只能当参考，别直接写进文章。
IHC 判读看的是膜染色，T 细胞小，胞质少，阳性细胞整个轮廓一圈棕色。
滤泡间区和副皮质区是 T 细胞密集的地方，生发中心以 B 细胞为主，那块空白是正常的，不是染失败。
三条操作建议
WB 用 12% 到 15% 的胶，21 kDa 要跑到底部三分之一处才分得开。
转膜用 0.2 µm 孔径的 PVDF，小分子量蛋白用 0.45 µm 容易穿过去。
切片厚 4 µm，T 细胞小，切厚了细胞叠在一起数不准。
IHC 用柠檬酸 pH 6.0 修复，扁桃体或者脾做阳性对照，滤泡间区应该满是阳性细胞。
WB 上样 30 µg，脾脏样本信号强，上多了邻近泳道会串。
下次切脾，同时切一张胸腺，两个组织的 T 细胞密度差得多，判读有参照。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | CD3E |
| 验证应用 | WB, IHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 +4°C |
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