星形胶质细胞标记，不止脑里有
兔单抗，S100β，四种应用
小鼠脑切片做 S100β，海马区星形胶质细胞的胞体和突起染得很完整，锥体细胞层干净。
换到一张外周神经的切片，束膜里也有一层阳性。
产品页把它标为星形胶质细胞标记，这是它最常用的场景，但阳性信号不只出现在脑里。做脑外组织，判断要留余地。
为什么星形胶质细胞用它
S100β 是钙结合蛋白家族的一员，在星形胶质细胞里含量高。
它分布在胞质和突起，染色形态是放射状，跟神经元和少突胶质细胞的形态能分开。
S100β 在施万细胞、黑色素细胞和部分软骨细胞里也有表达，外周组织的阳性要结合形态判断。
S100β 在胞内以钙结合形式存在，固定时间太长构象会变，染色变浅，四小时以内的固定比较稳。
做 WB 时脑组织上样 20 µg 就够，S100β 在脑里丰度高，上多了邻近泳道会串。
做脑组织的细胞分型，它常和 GFAP 一起用。两个标记的分布有重叠也有差别，双标能看出亚群。
这支的事实
兔单抗，克隆号 EP1576Y，IgG，无标记，Protein A 纯化。
种属写了人、小鼠、大鼠。应用列了 WB、IHC-P、IHC-Fr、IF/ICC 四项。
稀释比给得齐。WB 1/1000 到 1/5000，IHC-P 1/200 到 1/1000，ICC/IF 1/100。
冰冻切片的修复条件单独写了，10 mM 柠檬酸 pH 6.0 加 0.05% Tween-20，热修复。
缓冲液 pH 7.2 到 7.4，含 40% 甘油和 0.05% BSA。
石蜡和冰冻的条件不一样
石蜡切片用常规热修复，EDTA 或者柠檬酸都可以，1/200 到 1/1000。
冰冻切片按产品页给的条件走，柠檬酸加 Tween-20，修复时间和温度都要控制。
冰冻切片的形态好，但固定不足时抗原会丢，灌流固定要做透。
做厚片或者透明化样本，抗体渗透是瓶颈，孵育时间要拉长到 48 小时。
漂浮染色比玻片染色费抗体。一张脑片按孔算用量，一抗体积按 300 微升给，摇床低速，别让片子贴在壁上。
三条操作建议
双标时两个一抗是一起孵育还是分开，看宿主，同为兔源就要分步做。
双标配 GFAP，两个通道错开波长，S100β 用 488，GFAP 用 594。
IHC-P 从 1/500 起，1/200 只用在信号确实弱的样本上。
脑外组织做之前先跑一张脑切片做阳性对照，把真信号的样子定下来。
下次灌流，4% 多聚甲醛灌注后后固定两小时，别再延长，过固定会让抗原修复变难。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | S100B |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/200 - 1/1000 Perform heat-mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/1000 - 1/5000；ICC/IF 1/100；IHC-Fr Heat mediated antigen retrieval using sodium citrate buffer (10mM citrate pH 6.0 + 0.05% Tween-20). |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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