乙酰化 actin 认的是 N 端
兔单抗，ACTA2 与 ACTG2 共认
血管平滑肌细胞传到第五代，收缩标记开始掉，做乙酰化 actin 的 WB，条带比原代浅了一半。
同一批样本跑总 actin，两个代次几乎一样深。
总量没变，修饰变了。这支抗体认的是 N 端第三个氨基酸的乙酰化，反映的是蛋白加工成熟的状态，不是表达量。
乙酰化 E3 说明什么
新合成的 actin 前端多一段甲硫氨酸和半胱氨酸，加工过程中被切掉，露出第三个残基，再由乙酰转移酶加上乙酰基。
这一步做完，actin 才能正常聚合成纤维。没有这一步，蛋白在，但装配效率低。
ACTG2 在肠道和血管平滑肌里表达，做肠组织时两个靶点同时出现，条带分不开。
所以这个位点的乙酰化状态跟细胞骨架的成熟度有关，跟蛋白总量是两回事。
这支的事实
兔单抗，克隆号 E184，IgG，无标记，Protein A 纯化。
产品名里写了两个靶点，ACTA2 的乙酰化 E3 和 ACTG2 的乙酰化 E3。一支抗体同时认这两个，做平滑肌样本时分不出是哪一个。
种属写了人、小鼠、大鼠。应用列了 WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC 五项。
稀释比给得很细。WB 1/1000 到 1/5000，IHC-P 1/200 到 1/500，ICC/IF 1/500，流式胞内 1/20，ELISA 0.00002 到 1 µg/mL。
产品页提示 IHC 在小鼠肾、小鼠胃、大鼠肾和大鼠胃上观察到非特异染色。
做双标时的搭配
总 actin 和乙酰化 actin 一起染，两个通道能看出比例变化。
做 WB 时乙酰化信号弱，曝光时间给足，同一批膜统一曝光，别一张一张调。
但总 actin 抗体如果也是兔源，两个通道会打架。选一个直标，或者把宿主错开。
做 ELISA 用碳酸盐缓冲液 pH 9.6 包被过夜，洗涤液里加 0.05% Tween-20。
同一条膜上剥膜重孵不可取。乙酰化信号本来就弱，剥一次掉一半，两块膜分开跑更稳。
ELISA 的浓度范围跨度大，从 0.00002 到 1 µg/mL，做标准曲线时先摸线性区间。
包被浓度按说明书给的下限起，浓度高了曲线会弯，读出来的数反而不可靠。
三条操作建议
IHC 避开胃和肾，这两个组织产品页已经提示有非特异染色。
WB 用 1/2000 起，乙酰化信号通常比总蛋白弱，曝光时间要够。
做传代实验，原代和第五代各留一管，同一块膜上跑，比例变化比绝对值可靠。
下次做骨架染色，乙酰化和总 actin 分开两天做，避免二抗残留。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | ACTA2 acE3 |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, FCM, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/200 - 1/500 Internal test showed non-specific staining on mouse kidney, mouse stomach, rat kidney and rat stomach. Perform heat-mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/1000 - 1/5000；ICC/IF 1/500；Flow Cyt (Intra) 1/20 ab172730 - Rabbit monoclonal IgG, is suitable for use as an isotype control with this antibody. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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