细胞裂解液里，MMP2 不多

兔单抗，62 kDa，明胶酶 A

肿瘤细胞培养上清收下来做明胶酶谱，活性带很清楚。同一批细胞收裂解液跑 WB，MMP2 的位置几乎空的。

第一反应是抗体不行，换了新的一管，还是空的。

MMP2 是分泌型酶，做出来以后被运到细胞外。留在细胞里的那部分量很少，藏在裂解液里看不见。

分泌型酶在哪一相

MMP2 属于基质金属蛋白酶家族，底物是 IV 型胶原和明胶，参与基底膜降解。

它以酶原形式分泌，到细胞外被膜型 MMP 激活，前肽切掉才动得了。

上清里的酶原和裂解液里的酶原位置差不多，区分靠前肽，不靠分子量。

所以样本选择决定成败。条件培养基超滤浓缩之后上样，信号比裂解液强得多。

跑 WB 之前先做一次明胶酶谱，两个结果对着看。酶谱有活性带而 WB 空，多半是样本取错了相。

细胞裂解液里那点信号，主要来自还在运输途中的酶原，位置偏高一点。

这支的事实

兔单抗，克隆号 EPR1184，IgG，无标记，Protein A 纯化。产品页标注分子量 62 kDa。

种属写了人、小鼠、大鼠。应用列了 WB、FCM、IF/ICC 三项。

稀释比，WB 1/1000 到 1/5000，ICC/IF 1/250，流式胞内 1/400。

缓冲液 pH 7.2 到 7.4，含 40% 甘油和 0.05% BSA，-20°C 稳定十二个月。

产品页在 WB 说明里写了一句话，另一支同类抗体在 WB 上灵敏度更高，推荐作为替代。

产品页自己给了替代方案

这一条值得注意。做 WB 而且信号弱，可以先按产品页的建议换成推荐货号，不要花时间在优化上死磕。

条件培养基浓缩后蛋白总量低，BCA 定量常落在标曲下端，稀释一倍再测更准。

这支的强项在 ICC/IF 和流式，胞内染色 1/250 和 1/400，用在细胞层面的定位没问题。

做 IF 时细胞铺玻底皿，分泌出去的酶在胞外也有沉积，洗不干净会有一层雾。

做酶谱和做 WB 是两套系统。酶谱看活性，WB 看蛋白量，两个结果不一致很正常。

三条操作建议

流式胞内 1/400，固定破膜后信号在胞质，和膜标记分开读。

收上清前先换无血清培养基，饥饿十二小时，减少血清里的金属蛋白酶干扰。

上清超滤浓缩十倍，加 1 mM PMSF，冰上操作。

超滤管选 10 kDa 截留，别用 3 kDa。截留分子量太小，小杂蛋白会一起浓上来，上样后背景反而高。

IF 做胞质染色，4% 多聚甲醛固定，0.2% Triton 透化十分钟。

下次做侵袭实验，上清和裂解液各留一管，两个都跑。

关键参数

反应种属	Human, Mouse, Rat
抗原名称	MMP2
验证应用	WB, FCM, IF/ICC
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Monoclonal
纯化方式	Affinity purification Protein A
推荐稀释	WB 1/1000 - 1/5000 For Lysate preparation protocol, please refer to the protocol here. Compared with ab92536, ab181286 has higher sensitivity. We recommend ab181286 as an alternative for testing MMP2 in western blot.；ICC/IF 1/250；Flow Cyt (Intra) 1/400 For unpurified, use 1/70. ab172730 - Rabbit monoclonal IgG, is suitable for use as an isotype control with this antibody.
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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品牌	货号	品名
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