总 STAT3 做 CUT&RUN 前先验证
兔单抗，88 kDa，含 CUT&RUN-seq
细胞核提取物跑 STAT3，88 kDa 的位置有带，处理组和对照组差不多深。
同一批样本跑磷酸化 STAT3，处理组明显变深。
总蛋白没动，磷酸化上去了。这个结果说明通路被激活，但不说明 STAT3 的总量有变化。两支抗体测的是两件事。
总蛋白和磷酸化的分工
STAT3 被 JAK 激酶磷酸化以后形成二聚体，进核，结合到靶基因的启动子上。
磷酸化是开关，总量是池子大小。做通路抑制实验，两个数都要有。
同一条蛋白上有几个磷酸化位点，Y705 和 S727 常被分开看。做通路激活用前者，做丝裂原响应用后者，抗体的名字要看全。
做 CUT&RUN 和 ChIP，需要的是能认出染色质结合态 STAT3 的抗体，这个要求和 WB 不一样。变性条件下的好抗体，在非变性条件里不一定行。
这支的事实
兔单抗，克隆号 EPR787Y，IgG，无标记，Protein A 纯化。产品页标注分子量 88 kDa。
种属写了人、小鼠、大鼠。应用列了 WB、IHC-P、IF/ICC、流式胞内和 CUT&RUN-seq 五项。
稀释比，WB 1/1000 到 1/2000，IHC-P 1/200，ICC/IF 1/200，流式胞内 1/30 到 1/50。
产品页提到有 20 µL 的试用装，先试再放大，这个规格对做条件摸索的人省事。
缓冲液 pH 7.2 到 7.4，含 40% 甘油和 0.05% BSA。
CUT&RUN 的前置验证
先用 qPCR 验一个已知靶点，看富集倍数，别一上来就做全基因组测序。
每次反应的细胞数固定，抗体量才好评，不同细胞数之间不能直接比富集倍数。
阴性对照用不带靶点的基因区域，阳性对照用已知的 STAT3 结合位点。
建库前先跑一次 qPCR，富集倍数到五倍以上再往下做。
细胞数按 5 万到 50 万起，太少背景高，太多染色体缠在一起切不动。
抗体用量比 WB 高得多，20 µL 试用装刚好够摸两次条件。
建库前先看片段分布，集中在核小体之间那段才说明酶切到位，不然测出来的峰全是假象。
三条操作建议
WB 上样 20 到 30 µg，1/1000 起，别一上来就用 1/2000。
核转位判读要比核和胞质的信号，只看核内绝对亮度会被曝光带偏。
IF 做核转位，刺激后固定，看核内信号有没有增强，别只看总量。
CUT&RUN 前先跑一次 WB，确认这支在你手上的样本里能出单一条带。
下次做抑制剂实验，总 STAT3 和磷酸化 STAT3 一起跑，比例才是结论。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | STAT3 |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, CUT&RUN-seq |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/200 For unpurified use at 1/140.；WB 1/1000 - 1/2000；ICC/IF 1/200 For unpurified use at 1/140.；Flow Cyt (Intra) 1/30 - 1/50 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。