1/25000，省掉二抗那一步
小鼠单抗，HRP 直标 β-actin
做磷酸化 WB，一抗孵育完，二抗孵育完，洗膜，显影。内参那一栏还得再来一遍。
换成直标 HRP 的 β-actin，和目的抗体一起孵育，一次显影，内参和目的一起出。
省下来的不是时间，是一轮洗膜带来的信号损失。
直标的好处和限制
直标抗体自带报告酶，不需要二抗。少了二抗这一步，背景来源少一个，非特异条带也少。
直标的另一个好处是不用担心二抗跟别的通道打架，做磷酸化 WB 时省掉一次孵育。
限制在多重检测。HRP 只有一个通道，做荧光双标时它派不上用场。
七个种属里包括仓鼠和牛，做非常规样本时省得另找货号。
另一点是这支本身是小鼠来源。如果用抗小鼠二抗做别的通道，二抗会把这个小鼠抗体也认出来。
这支的事实
小鼠单抗，克隆号 AC-15，IgG1，HRP 标记。靶点 β-actin，产品页标注分子量 42 kDa。
种属写了七个，人、小鼠、大鼠、狗、猴、牛、仓鼠。
应用只有 WB 一项。稀释比 1/25000 到 1/50000，这个倍数在同类产品里算很高的。
免疫原是 ACTB 前 50 位氨基酸的合成肽段，偶联血蓝蛋白。
缓冲液是 PBS，pH 7.4，含 0.01% 硫柳汞。储存条件 4°C，不要冻。
1/25000 是多稀
照常规 1/5000 加，背景会一片黑。第一次用先按 1/25000 配，信号弱再往 1/10000 走。
配好的工作液当天用完，稀释后酶活下降快，放四度过夜信号会掉三成。
配的时候按体积算，一毫升稀释液里加 40 微升以下。
一支 50 µL 的规格，按 1/25000 算，够配一升多工作液，用量比看上去省得多。
硫柳汞是防腐剂，对某些显影底物有影响，用高灵敏底物时先小量试。
显影底物越灵敏，抗体浓度越要减，底物本身会把背景带出来。
不同批号的偶联率有差别，换批时倍数要重新摸一次，别直接用上一批的条件。
三条操作建议
这支只有 WB 一项应用，IHC 和流式用不上，选之前先确认实验类型。
和目的抗体同时孵育，室温一小时，或者 4°C 过夜，两者都行。
洗膜用 TBST，Tween-20 给 0.05%，浓度高了条带会淡。
洗膜三次，每次五分钟，直标抗体洗得越干净背景越低。
做荧光双标时不要用它，换未标记的 β-actin 加荧光二抗。
显影时用同一批底物、同一曝光时间，两次实验的条带深浅才可比。
下次配工作液，按当天用量配，剩下的不要留到第二天。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Dog, Monkey, Bovine, Hamster |
| 抗原名称 | ACTB |
| 验证应用 | WB |
| 偶联标记 | HRP |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG1 |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | WB 1/25000 - 1/50000 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 +4°C |
相关产品
点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。