Fc 受体没封，流式多出一群
大鼠 IgG2b 单抗，0.5 mg/ml，流式与封闭双用
巨噬细胞做流式，同型对照那一管也亮，PE 通道整片抬高。
换一批抗体还是这样，换个人做还是这样。
问题出在 Fc 受体上：它认的是抗体的 Fc 段，不认抗原，任何 IgG 都能被它拽住。
不封这一层，染色结果里永远混着这部分非特异结合，弱阳性根本判不出来。
封闭不到位的信号长什么样
脾脏、肺、腹腔灌洗液、肿瘤浸润样本，这几类髓系细胞占比高，最容易看出来。
图上表现为整群往右移，而不是分出一个小群，新手常把它误判成弱阳性。
还有一种更省事的判断：拿一管样本做不加封闭的平行染色，如果它和加了封闭的图几乎重合，说明这批细胞的 Fc 结合本来就低，封闭用量可以往下调。
判断的办法不复杂：同型对照和样本用同一浓度、同一孵育条件，对照管明显高过未染色管，就是 Fc 结合没压住。
CD16 和 CD32 在中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、Kupffer 细胞、肥大细胞、B 细胞上都有表达，NK 细胞上最高。
2.4G2 认的是哪一段
克隆号 2.4G2，大鼠 IgG2b κ，免疫原是小鼠 BALB/c 巨噬细胞系 J774。
产品页写它识别小鼠 FcγIII（CD16）与 FcγII（CD32）胞外段上一个共同的非多态表位，也提到它能通过自身 Fc 段结合 FcγI（CD64）。
三个受体一起被挡住是可能的，但别指望封一个等于全封。
浓度 0.5 mg/ml，亲和层析纯化，缓冲液是含不超过 0.09% 叠氮钠的水溶液，标注 RUO，仅供科研使用。
按细胞类型调用量
产品页没有给每管的固定用量，这块只能自己摸。
常见起点是 10^6 细胞加 0.5 到 1 µg，脾细胞这类髓系多的样本往上取，纯化 T 细胞和细胞系往下取。
封闭要单独孵育，放在荧光抗体之前，不要混在同一管里加。混着加，两者抢的不是同一个位点，但结果不稳定。
固定之后再封意义不大，膜蛋白构象变了，表位未必还在，做了也是白做。
封闭和染色之间不用洗太多次，一次冷 PBS 漂洗就够，洗多了细胞会聚团，上机前还得再过滤一遍。
三条操作建议
封闭液里别加全血清，血清里的 IgG 自己就会结合 Fc 受体，等于又灌了一批配体进去。
4°C 冰上孵育十五到二十分钟够用，CD16 容易内吞，别在室温搁太久。
做胞内染色时，封闭放在固定通透之前，膜破了再封没有意义。
下次在脾细胞上跑一管梯度，0.25、0.5、1、2 µg 各一管，看同型对照什么时候落到未染色管的水平。
关键参数
| 反应种属 | Mouse |
| 抗原名称 | BD Fc Block™) |
| 验证应用 | FCM, IF-FRO, IP, Blocking |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Rat SD, also known as Sprague-Dawley (outbred) IgG2b, κ |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | affinity chromatography |
相关产品
点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。
| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| BD Pharmingen | 553141 | BD Pharmingen™ Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block™) 本文产品 |
| BD Pharmingen | 553142 | ™ Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block™) |
| BD Pharmingen | 550274 | ™ Purified Rat Anti-Mouse CD31 |
| BD Pharmingen | 550539 | ™ Purified Rat Anti-Mouse CD45 |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。