TGF-β1 的条带跑在两个位置

兔单抗，人鼠三个种属，WB 与 IHC-P 双验证

做肾纤维化模型，同一块胶上，TGF-β1 的条带出现在 12.5 kDa 和 25 kDa 两个位置。

学生以为低的那条是降解，一路加大上样量，两条一起变粗。

其实还原剂决定了你看到哪一个：单体 12.5 kDa，二聚体 25 kDa，样本里两种形式同时存在。

另外还有潜伏复合物，分子量在七十几 kDa 以上，跑不进 12% 的胶。

如果只关心成熟形式的分泌量，用 15% 的胶把低分子量区域拉开，比在高浓度胶里找潜伏复合物省事得多。

条带位置取决于还原条件

加 DTT 或 β-巯基乙醇并煮沸，二硫键断开，主要看到 12.5 kDa 的单体带。

不加还原剂，二聚体保留，25 kDa 那条占主导。

两种条件都能用，关键是同一批样本前后统一，否则组间没法比。

还原与非还原的样本不要共用同一套分子量标准去推大小，二聚体的位置正好压在内参附近，读错了会以为上样不齐。

从细胞裂解液直接跑，常能看到高分子量的潜伏形式，那不是杂带，是 TGF-β1 还没被释放出来。

这支的事实

兔单抗，克隆号 EPR21143，IgG，无标记，Protein A 亲和纯化。

种属写了人、小鼠、大鼠三个，应用列 WB 和 IHC-P 两项，没有流式也没有 IP。

产品页提到特异性在 TGFB1 敲除的 A549 细胞里做过 WB 验证，这比条带位置是更硬的证据。

敲除验证对分泌蛋白尤其重要，血清和培养基里本身就带 TGF-β1，批次一换背景就变。

缓冲液是 PBS 加 40% 甘油和 0.05% BSA，pH 7.2 到 7.4，含 0.01% 叠氮钠，收到后避免反复冻融。

免疫原信息产品页写的是专有信息，没有公开具体肽段。

IHC 上胞外基质也会亮

TGF-β1 是分泌蛋白，切片上信号不集中在细胞里，基质和细胞间质也会染色。

判断特异性别只看某一群细胞亮不亮，要看整体分布是否符合预期，再加一张阴性组织对照。

石蜡切片修复用柠檬酸还是 EDTA，产品页没有给，先按实验室常规走，两种各试一次就有数。

抗体稀释比同样没有给，从 1/1000 起试，按信噪比往上或往下调。

三条操作建议

上样量按总蛋白定量，还原与非还原各跑一块胶，别在同一块里比对。

封闭用 5% 脱脂奶粉，TGF-β1 不是磷酸化抗体，奶粉不影响。

显影时间别拉太长，12.5 kDa 附近容易过曝，一过曝就看不出组间差异。

下次把同一份样本分还原与非还原两管，各上 20 µg，并排跑一次。

关键参数

反应种属	Human, Mouse, Rat
抗原名称	TGFB1
验证应用	WB, IHC
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Monoclonal
纯化方式	Affinity purification Protein A
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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品牌	货号	品名
Abcam	Ab215715	Anti-TGF beta 1 antibody [EPR21143] 本文产品
Abcam	Ab179695	Anti-TGF beta 1 antibody [EPR18163]
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Abcam	Ab52642	Anti-S100 beta antibody [EP1576Y] - Astrocyte Marker

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