正常脑里，pS129 几乎不亮
兔单抗 [EP1536Y]，三个种属，五个应用
包涵体病的模型做 IHC，阴性对照的切片干干净净，样本上只有零星几个细胞有颜色。
换一支抗体，还是这样，换一批片子，依然这样。
pS129 在正常组织里本来就低，它标的是病理状态下的磷酸化形式，不是总 α-突触核蛋白。
把稀释比从 1/500 提到 1/100，背景先起来了，真信号没多几个。
正常样本几乎没有信号
这不是抗体的问题，是靶点本身的存在方式。
判断一支 pS129 好不好用，看的是病理样本里阳性结构的形态和阴性脑片的干净程度，不是条带有多黑。
如果阴性脑片上出现弥漫背景，先怀疑封闭和洗涤，再怀疑抗体浓度。
石蜡切片上，磷酸化表位对抗原修复敏感，修复不足时阳性细胞数会明显偏少。
蛋白酶 K 处理对磷酸化表位不太友好，能不用就不用，优先走热修复。
这支的事实
兔单抗，克隆号 EP1536Y，IgG，无标记，Protein A 亲和纯化。
种属是人、小鼠、大鼠，应用列 WB、IHC-P、IHC-FrFl、ELISA、Dot blot 五项。
IHC-FrFl 是冰冻漂浮切片，跟石蜡切片是两套处理流程，别混着用同一套条件。
缓冲液是 PBS 加 40% 甘油和 0.05% BSA，pH 7.2 到 7.4，含 0.01% 叠氮钠。
免疫原信息产品页写的是专有信息，没有公开具体肽段，位点特异性只能靠阳性样本自己验证。
漂浮切片与石蜡切片的差别
漂浮切片靠自由浮动完成孵育和洗涤，通透用 Triton，封闭时间比石蜡短，不然信号被压掉。
石蜡切片走脱蜡、修复、封闭、孵育的流程，修复液先用柠檬酸 pH 6.0 试，微波十五分钟。
石蜡片的阳性判定看胞质和神经突起，漂浮片能看到更细的突起，两种片子的读法要分开写，别用同一套标准。
两种切片上阳性结构的形态不一样，漂浮片更容易看到神经突起里的点状信号。
漂浮片在转移和封片时容易破，用软毛笔托，别用镊子直接夹。
同一批实验里不要一半漂浮一半石蜡，读片时没法互相印证。
三条操作建议
封闭用 5% BSA 或商品化无蛋白封闭液，别用脱脂奶粉，奶粉里的酪蛋白本身就是磷酸蛋白。
一抗 4°C 过夜，TBST 洗三次，每次十分钟，磷酸化抗体洗涤不足时背景最难降。
Dot blot 和 ELISA 这两个应用，产品页没有给稀释比，先按 WB 的工作浓度试一次。这两个应用的封闭剂也要换，ELISA 用 1% BSA，Dot blot 用 3% BSA，别沿用 IHC 的血清。
下次在同一个脑片上同时做阴性对照和病理样本，稀释比从 1/200 到 1/2000 做四个点。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | SNCA phospho S129 |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, Dot, IHCFl |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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