Myc 标签跑出两条带
兔多抗，五种应用里含免疫电镜
构建带 Myc 标签的质粒，转染后做 WB，抗 Myc 一跑，除了目的条带，上面还有一条很粗的带。
以为是二聚体，加还原剂还是这样。
换空载体对照，那条带也在。
标签抗体的背景常常来自内源蛋白和降解片段，不一定是你的构建出了问题。
过表达之后多出来的那条带
Myc 标签的表位序列很短，抗体识别的位点也短，脱靶概率比靶点特异抗体高。
高丰度过表达时，降解片段带着标签，会形成一串小分子量条带。
判断办法是跑空载体对照和未转染对照，只在转染组出现的才是真信号。
如果两个对照里都有那条带，先考虑内源 c-Myc，换一个标签或者做敲低再验证，别急着改构建。
也可能转染量过高，降到原来的一半再跑一次，背景带跟着变淡就说明是过表达造成的。
如果目的条带和背景带靠得太近，把胶的浓度提高一档，距离就拉开了。
这支的事实
兔多抗，IgG，无标记，亲和纯化。
种属一栏是空的，标签抗体不需要指定种属，跨物种都能用。
应用列了 WB、IHC-P、IHC-Fr、ICC/IF、IP、EM 六项，规格 100 µg。
缓冲液只标了含 0.1% 叠氮钠，没有写其他成分。
EM 这个应用在同类产品里不常见，做免疫电镜可以用，但前处理要求高，不是常规 WB 的条件能平移的。
EM 与 IP 的额外要求
免疫电镜要求抗体浓度高、标记颗粒小，金标记二抗粒径选 5 到 10 nm。
固定剂用 4% 多聚甲醛加 0.1% 戊二醛，戊二醛浓度高了会破坏表位，宁可低一点。
IP 时标签抗体的优势是能拉任何带标签的蛋白，劣势是拉下来的复合物里混着内源 Myc。
做 IP 前用空载体转染的样本做一次预清除，背景能降不少。
洗脱用低 pH 甘氨酸或者标签肽竞争，后者温和，拉下来的复合物不容易散。
如果拉下来的是膜蛋白，裂解液里加 0.1% DDM 比 NP-40 温和。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，WB 从 1/1000 起，IP 每管 2 到 5 µg。
封闭用 5% 脱脂奶粉，室温一小时，标签抗体对奶粉不敏感。
如果目的蛋白小于 20 kDa，改用 15% 的胶，别让条带跑出胶底。小于 20 kDa 时转膜时间也要缩短，十五分钟够，长了会穿膜。转完用丽春红确认一次，比反复换抗体省时间，也省样品。
下次同一批样本跑三块胶：未转染、空载体、目的质粒，背景带一对比就清楚了。
关键参数
| 抗原名称 | MYC tag |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC, IP, EM |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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