IL-6 在裂解液里查不到
兔多抗，仅人样本，21 kDa，全血清来源
做炎症模型，想验证 IL-6 的分泌，拿细胞裂解液跑 WB。
21 kDa 的位置什么都没有，只有一片糊。
IL-6 是分泌蛋白，合成后很快释放到培养基里，裂解液里留不下多少。
要看到它，得去上清里找。
培养上清里找不到那条带
上清里的 IL-6 浓度常在 pg/mL 级别，直接上样跑胶，远低于 WB 的检出限。
常规做法是先浓缩，超滤管截留 10 kDa，把 20 mL 上清缩到 200 µL。
或者用抗体偶联磁珠做富集，再洗脱跑胶，成本高但干净。
不浓缩就直接跑，看到的往往是非特异条带，越看越像阳性。
判断上清里有没有 IL-6，WB 只作定性，定量交给 ELISA，两者的线性范围差得远。
上清收完立刻加蛋白酶抑制剂，IL-6 在 37°C 放两小时就掉一半。
这支的事实
兔多抗，IgG，无标记，免疫原是人 IL-6 全长重组蛋白，UniProt 编号 P05231。
种属只写了人，应用列 WB 和 IHC-P 两项，分子量 21 kDa，规格 200 µL。
缓冲液标注为 98.6% 全血清加氯化钠和磷酸钾溶液，pH 7.2。
缓冲液里没有甘油，-20°C 冻存后融化要轻混，别涡旋，血清蛋白容易起泡变性。
全血清来源，里面还带着大量其他抗体，背景比亲和纯化的多抗高，稀释比要给足。
多抗批间差异存在，换批号后重跑一次阳性对照再往下做。
如果背景压不住，用磁珠把 IL-6 拉下来再跑胶，比直接跑上清干净得多。
磁珠富集后洗三次，收尾用低盐缓冲液，洗脱体积控制在 30 µL。
把分泌蛋白浓缩回来
刺激后收集上清，离心去掉细胞碎片，0.22 µm 过滤。
超滤浓缩二十倍，加 5× 上样缓冲液，煮沸五分钟。
上样量按浓缩后的体积算，不要按原体积折算，容易低估实际用量。
同时留一份不浓缩的上清跑一块胶，对比看浓缩有没有带进假带。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，WB 从 1/500 起，全血清来源的抗体浓度要给足。
封闭用 5% 脱脂奶粉，室温一小时，IL-6 不是磷酸化抗体，不挑封闭剂。
做 IHC 时 IL-6 阳性在胞质，炎症组织里散在分布，别指望成片。IHC 上 IL-6 的阳性常出现在炎症灶边缘，取图时把病灶一起框进去。炎症重的区域信号强，别拿一块热区代表整张片子，先看分布再看强弱。
下次把上清浓缩二十倍，同时跑一块未浓缩的，两条一起看。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | IL6 |
| 验证应用 | WB, IHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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