126 kDa 的膜蛋白怎么转
兔单抗 [EPR1344]，126 kDa，三个种属
脑组织做 CD11b 的 WB，小胶质细胞标记，126 kDa。
转膜一小时，膜上一片空白，丽春红染色才发现大蛋白根本没转过去。
改成湿转，两小时，冰盒压着，条带才出来。
一百多 kDa 的膜蛋白，转膜条件是第一个坎。
126 kDa 转不干净
半干转对高分子量蛋白不友好，超过 100 kDa 效率掉得快。
湿转用 100 V 两小时，槽里放冰盒，缓冲液里加 0.05% SDS 帮助解离。
PVDF 膜比 NC 膜更适合大蛋白，用前甲醇活化三十秒。
转完做一次丽春红染色，确认蛋白真的在膜上，这一步能省掉很多重复。
条件实在调不出来，改用 8% 的胶延长转膜时间，比反复换膜省事。
转膜电流别超过 350 mA，过高会发热，缓冲液一热大蛋白就沉在胶里。
这支的事实
兔单抗，克隆号 EPR1344，IgG，无标记，Protein A 亲和纯化。
种属是人、小鼠、大鼠，应用列 IHC-P、WB、mIHC 三项，分子量 126 kDa。
缓冲液是 PBS 加 40% 甘油和 0.05% BSA，pH 7.2 到 7.4，含 0.01% 叠氮钠。
产品页提到有 20 µL 的试用装，第一次用可以从小规格起。
CD11b 也叫 ITGAM，是髓系细胞的标志，糖基化程度高，实际条带常比理论值宽一些。
糖基化不完全时条带会在 120 到 140 kDa 之间铺开，框带按整条算。
条带上方还有一条更慢的带，那是未成熟的糖基化形式，定量时要说明。条带位置偏高不一定是脱靶，先做一次 PNGase F 再看。
湿转与半干的差别
半干转省时间，适合小于 100 kDa 的蛋白，大蛋白容易残留在胶里。
湿转慢，但电场均匀，大蛋白转移效率高，代价是缓冲液用量大。
转膜缓冲液里的甲醇比例影响大蛋白，降到 10% 比 20% 好转。
转完把胶拿去考马斯亮蓝染一下，看有没有残留，比凭感觉猜准得多。
组织样本里 CD11b 丰度不高，每孔上 40 µg 才勉强出带，细胞样本 20 µg 就够。
IHC 上 CD11b 的阳性细胞常聚集在坏死区周围，取图要带上正常区域做对比。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，WB 从 1/1000 起，按条带强度调。
裂解液用含 1% NP-40 的，CD11b 是膜蛋白，别用不含去垢剂的缓冲液。
IHC 上小胶质细胞的染色常呈分支状，判断阳性看胞膜和突起，不是核。
下次转膜前先做一次丽春红，把条件定死，再谈定量。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | ITGAM |
| 验证应用 | WB, IHC, MIHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab133357 | Anti-CD11b antibody [EPR1344] 本文产品 |
| Abcam | Ab8878 | Anti-CD11b antibody [M1/70] |
| Abcam | AB1211 | Anti-CD11b + CD11c antibody [OX42] |
| Abcam | Ab52478 | Anti-CD11b antibody [EP1345Y] - C-terminal |
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