FOXP3 染不上，多半是修复
鼠单抗 [236A/E7]，仅人，48 kDa
肿瘤切片想标 Treg，FOXP3 染了两遍，淋巴细胞核里都是空的。
把修复时间从十分钟加到二十分钟，信号才出来。
FOXP3 是核内转录因子，表位被甲醛交联锁住，修复不到位，抗体再浓也白搭。
这一条在石蜡切片上几乎是决定性的。
核染弱是修复没到位
甲醛固定会把蛋白交联，核内转录因子的表位尤其难暴露。
EDTA pH 9.0 高压修复两到三分钟，或者水浴 98°C 二十分钟，比微波柠檬酸更稳。
修复不足的表现是核内空白、背景干净，看起来像阴性，最容易误判。
修复过度的表现是核膜勾边、背景升高，两种都不好用。
修复液体积要够，片子干过一次就废，高压锅里的液面必须没过切片。
修复后用 PBS 洗三次，每次五分钟，残留的 EDTA 会影响后续显色。
这支的事实
鼠单抗，克隆号 236A/E7，IgG1，无标记，Protein A 亲和纯化。
种属只写了人，应用列 IHC-P、WB、mIHC 三项，分子量 48 kDa。
缓冲液是 PBS 加 40% 甘油和 0.05% BSA，pH 7.4，含 0.01% 叠氮钠。
产品页提到有 10 µg 和 20 µg 的试用装，后面还有更大的规格，先试再放量。
小规格大概能做十几张片子，够把稀释比和修复条件定下来。
只有冰冻切片时 FOXP3 也能染，但核形态不如石蜡清楚。
mIHC 这一项是这支的强项，多重染色时核标记不容易丢。
人组织用鼠源一抗的背景
人组织里含内源小鼠免疫球蛋白的可能很低，但切片上若有鼠源抗体灌注或者鼠源移植瘤，就会有交叉。
更常见的背景来自二抗与内源 IgG 的结合，加一步正常血清封闭能压下去。
做 mIHC 时，鼠源一抗要配不同的酪胺信号，加抗体的顺序不能乱。
如果做双标，把 FOXP3 放在靠后的一步，核染不容易被前面的洗脱步骤带走。
mIHC 每轮之间要做抗体剥离，剥离液温度高会伤核抗原，时间按下限走。剥离后先空跑一轮，不加一抗只加二抗，看有没有残留信号，这一步能救回很多假阳性。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，IHC-P 从 1/100 起，先试三个浓度再定。
封闭用 5% 正常山羊血清，室温三十分钟，别用 BSA 单打。
DAB 显色在显微镜下看到棕色即停，泡久了全片发黄。
下次同一批片子同时做扁桃体和肿瘤，扁桃体的 T 细胞区应该有成片的核染。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | FOXP3 |
| 验证应用 | WB, IHC, MIHC |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG1 |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
相关产品
点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。
| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab20034 | Anti-FOXP3 antibody [236A/E7] 本文产品 |
| Abcam | Ab215206 | Anti-FOXP3 antibody [EPR22102-37] |
| Abcam | Ab22510 | Anti-FOXP3 antibody [mAbcam 22510] |
| Abcam | Ab6721 | Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。