TBR1 到底亮在第几层
兔多抗，74 kDa，WB 与 IHC-P 双验证
发育中的皮层做 TBR1，想标记深层神经元。
切片染出来整片都亮，从脑膜到脑室，看不出分层。
问题不在抗体，在切片方向：皮层切斜了，六层压在一起。
重切一次，冠状面，垂直切，层次立刻清楚了。
皮层六层里亮在哪一层
TBR1 是深层神经元的标记，信号集中在皮层深部和海马。
P0 到 P7 的小鼠脑信号最强，成年后下降，做时间点要选对。
阳性是核染，胞质不亮，判断时看核的轮廓。
如果核染呈颗粒状、边界模糊，多半是抗体浓度过高，往下调两档再看。
TBR1 的阳性层在不同年龄的切片上位置会变，成年脑里深层更集中。
如果整片均匀发亮，先怀疑切片方向和修复过度，再怀疑抗体浓度。
这支的事实
兔多抗，IgG，无标记，抗原亲和纯化，免疫原信息产品页没有给全，只能按靶点蛋白的结构去推它认哪一段。
种属是人、小鼠、大鼠，应用列 IHC-P 和 WB 两项，分子量 74 kDa，规格 100 µg。
缓冲液成分产品页也没有细列，开管后按常规分装冻存。
多抗的批间差异比单抗明显，做发育时间序列时尽量用同一个批号。
没有流式和 IP 的验证，这两个应用要自己摸条件。
切片方向要正
冠状面切片能同时看到两侧半球和皮层分层，矢状面适合看前后轴。
切片厚度 5 µm 足够，太厚了层次重叠，读片时说不清阳性在哪层。
脱蜡后抗原修复用柠檬酸 pH 6.0，微波十五分钟，TBR1 的表位不算难暴露。
修复后自然冷却到室温再洗，骤冷会让脑片脱落。
贴片用防脱载玻片，普通片子做热修复很容易掉。烤片两小时，65°C，再进修复锅，这一步能少掉一半脱片。
切片前先看一眼整体形态，皮层有挤压或坏死的样本直接弃用，免得白染一批。
后面要做双标的话，两个一抗分开孵育，混在一管里容易互相压制信号。两个一抗的种属要错开，兔源配鼠源最省事，二抗也不会打架。
拍图时把脑膜和脑室都框进去，读者才能判断层次。
切片有皱褶就重切一张，硬读出来的分层站不住。
计数时按层报阳性率，比整片报一个数有用得多。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，IHC 从 1/500 起，WB 从 1/1000 起。
做 WB 时取皮层组织，去掉海马，避免信号被稀释。
发育时间点至少取三个，P0、P7、成年，趋势才看得出来。
下次切一张完整的冠状面，先低倍拍全层，再高倍拍阳性层。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | TBR1 |
| 验证应用 | WB, IHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
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