同型对照不是随便配一支 IgG
Rabbit IgG [EPR25A]，七种应用都做了验证
流式跑完，样本管阳性率 12%，同型对照管是 15%。
同型对照比样本还亮，这个结果只能说明一件事：对照配错了。
不是所有 IgG 都能当同型对照，也不是按同一个稀释比配就对了。
配的是浓度
同型对照的作用是把非特异结合的量标出来。要让它和样本可比，两者的抗体质量浓度必须一致。
按稀释比配是最常见的错误。一抗 1/200，对照也 1/200，看起来公平，但两支抗体的储存浓度往往不同，1/200 稀释之后，落到管子里的微克数差好几倍。
ab172730 的产品页把这句话写在了 dilution 一栏里：请稀释到与所用一抗相同的浓度，而不是相同的稀释倍数。
换算一次只要一分钟。一抗浓度乘上加入体积，得到微克数，再倒推对照要加多少微升。
这支对照覆盖的系统
EPR25A 克隆，兔单克隆，IgG 亚型。它本身不认任何靶点，用途是替代兔源一抗做阴性参照。
验证过的应用写了七个：WB、IHC-P、流式、ICC/IF、IP、ChIP-seq 和 CUT&RUN-seq。
这个覆盖面是有意义的。同一支对照能跟着兔单抗走完整个课题，免疫组化、流式和测序前的染色不用换参照物。
液体剂型，纯化方式是 protein A 亲和纯化。同一批次的对照和实验抗体一起用，能把批间差异这一项排除掉。
稀释按应用分开。IHC-P 给的是 5 微克每毫升，ChIC 和 CUT&RUN-seq 给的是每次反应 0.5 到 2 微克。ICC/IF 和流式都注明按一抗浓度配。
测序类实验里的量
ChIP-seq 和 CUT&RUN-seq 对背景最敏感。抗体带进去的非特异结合会被扩增成峰，在热图上表现为一片均匀的信号。
对照反应按 0.5 到 2 微克加，跟实验组的抗体量对齐，不要按体积对齐。
反应体系里珠子量也要对齐。珠子多了，非特异吸附跟着涨，对照组会出现假富集，把实验组的真信号淹掉。
做完测序，先看对照组的比对率和峰数量。对照组出现明显富集，实验组的峰就要打折看。
三条操作建议
把一抗和对照的质量浓度写在实验记录上，每次配完算一遍微克数，不要凭印象。加样体积差别太大时，缓冲液成分会跟着变，抗体结合的效率也变。
流式的同型对照要和样本用同一批二抗、同一个孵育时间、同一个洗涤次数，任何一项不同都失去可比性。
IHC 的对照切片和样本切片放进同一个湿盒，修复和显色一起做。分开做就没有对照的意义。
下一次配流式管，先算微克，再算微升。
关键参数
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, IP, ChIP-seq, CUT&RUN-seq |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 5 µg/mL Please note: This product should be diluted to the same concentration (not dilution) of the primary antibody to be used. Perform heat-mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.；ICC/IF Please note: This product should be diluted to the same concentration (not dilution) of the primary antibody to be used.；Flow Cyt Please note: This product should be diluted to the same concentration (not dilution) of the primary antibody to be used.；ChIC/CUT&RUN-seq 0.5-2 µg |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。