纤连蛋白染出来，先分清是哪一种
Anti-Fibronectin，兔多抗，WB/IHC/IF 三用
单侧输尿管结扎第 14 天取肾，对侧当对照，同一张玻片做 Masson 和纤连蛋白免疫组化。
Masson 蓝的那一片确实在间质。可纤连蛋白的棕色，对侧正常肾里也有，而且血窦周围更深。
如果只按颜色深浅打分，这组数据没法用。
血浆里也有纤连蛋白
纤连蛋白有两种来源。一种由细胞分泌，沉积在细胞外基质里，参与黏附和迁移；另一种是可溶的，在血浆里循环，浓度不低。
常规固定和切片之后，血管腔和血窦里的血浆蛋白会留下来。抗体识别的是整个分子，两种形式都认，染色就会带上血管。
真正想看的，是间质里沉积的那一部分。判读时把血管腔、肾小球毛细血管袢排除掉，剩下的才是纤维化的信号。
这也是为什么同一块组织要看部位而不是看总强度。
这支抗体的数据
ab2413 是兔多克隆，IgG 亚型，说明书覆盖人、小鼠两个种属。
验证过的系统三个：WB、IHC-P、ICC/IF。要在一个课题里同时做组织切片和细胞实验，一支抗体能接上。
产品页没有给固定的稀释比。这种情况下按实验室已验证的条件走，IHC 从较稀的一档试起，WB 按常规多抗的区间设梯度，不要直接照搬别的抗体的数。
产品页标的分子量是 269 千道尔顿。这个大小在 WB 上转膜要延长，湿转时甲醇比例别太高，甲醇多了大分子反而转不动。
多抗的优势是识别多个表位，甲醛固定之后即便部分表位被交联，也还有别的能结合。代价是背景相对高一点，封闭和洗涤要多花时间。
判读先定区域
先在低倍下圈出皮质、髓质和肾盂，再逐区看。间质的阳性是网状的，沿着肾小管基底膜铺开；血浆的阳性是均匀填在管腔里的。
两者在低倍下都像棕色，高倍下不一样。空腔里均匀无结构的是血浆，沿着细胞边界走的是基质。
做免疫荧光时，纤连蛋白的纤维状结构在细胞外铺得很开，焦平面选在细胞贴壁那一层，往上一走就糊。
做定量的话，避开血管和肾小球，只统计小管间质区域，阈值固定下来，整批片子一起测。
切片厚一点更好看。纤连蛋白是网状结构，切薄了容易只看到断点，判读时误认为表达低。
三条操作上的事
封闭用正常血清，不要用 BSA。纤连蛋白会结合部分血清蛋白，封闭不充分时背景会更乱。
切片修复之后先用一张正常组织试染，确认血管内的着色程度，再定判读标准。
WB 上要注意条带位置，纤连蛋白分子量大，转膜时间要够，不然高分子量区域会丢。
下一批片子，先在对侧肾上把血管的染色强度记下来，再去看结扎侧。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse |
| 抗原名称 | FN1 |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 +4°C |
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