E-cadherin 掉下去，未必是 EMT
E-cadherin 多抗，八个应用覆盖三物种
上皮细胞传代，胰酶消化了 8 分钟才吹下来。
做 Western 一看，E-cadherin 的条带比上一代浅了一半，同批细胞 β-actin 没变。
差点按 EMT 写进结论。重做一次，消化改到 3 分钟，条带回来了。
胰酶切的就是它
E-cadherin 是钙依赖的跨膜黏附蛋白，胞外段负责细胞之间的连接。它的胞外结构域对胰酶很敏感。
消化时间一长，胞外段被切掉，抗体认的表位跟着丢，WB 上就表现为表达下调。
细胞传代次数多了、消化时间不稳定，会做出一条漂亮的下调曲线，但那不是生物学变化。
做 EMT 研究的时候，这个假阳性极常见。上皮标记下降加间质标记上升才构成证据链，单看一个指标容易误判。
另一个容易忽略的是细胞密度。铺得太密，连接处重叠，膜着色连成一片，看着像强阳性。铺板密度按孔的大小定，六孔板和共聚焦小皿不是一个量级。
这支抗体的应用面
20874-1-AP 是兔多克隆，IgG 亚型，覆盖人、小鼠、大鼠三个种属。
验证应用写了八个：WB、IHC、ELISA、流式、ICC/IF、石蜡切片免疫荧光、冷冻切片免疫荧光和 IP。
石蜡和冷冻两种切片都单独列了荧光应用，这在多抗里不算常见。石蜡切片需要热修复，冷冻切片不用，两者的染色条件要分开建。
纯化方式是抗原亲和纯化，液体剂型。多抗能识别多个表位，甲醛固定之后仍然有可用的位点。
产品页没有给固定稀释比。多抗做 WB 一般用较稀的一档，做组化要浓一些。
染色看的是轮廓
E-cadherin 定位在细胞间连接处。正常的单层上皮，染色呈蜂窝状的网格，每个细胞的边界都清楚。
肿瘤组织里，如果膜着色断断续续，甚至跑到胞质里，那才是连接功能受损的表现。判读用同一个物镜倍数，不同倍数下对连续性的判断会不一样。
膜着色消失加胞质弥漫着色，两者合起来才有意义。只看总强度，很容易被切片厚薄和细胞密度带偏。
三条操作建议
传代消化时间固定下来，不同批次的细胞用同一个计时，这是最省事的对照。换胰酶替代物之后切点不同，降解程度也不一样，要重新定时间。
WB 上样量按细胞数算，不同代次的细胞体积差别大，按体积上样容易偏。
免疫荧光做石蜡切片时，热修复之后先试一片，确认膜结构没有被修复液泡散。冷冻切片更省事，不用修复，但样品要新鲜。
下一次传代，消化计时器定在 3 分钟。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | E-cadherin |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, FCM, IF/ICC, IF-P, IF-FRO, IP |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Antigen affinity purification |
| 储存条件 | Store at -20°C. Stable for one year after shipment. Aliquoti |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| proteintech | 20874-1-AP | E-cadherin Polyclonal antibody 本文产品 |
| abclonal | A20798 | E-Cadherin Rabbit mAb |
| BD Pharmingen | 610181 | BD Transduction Laboratories™ Purified Mouse Anti-E-Cadherin |
| BD Pharmingen | 610182 | BD Transduction Laboratories™ Purified Mouse Anti-E-Cadherin |
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