F4/80 流式，从 1/10 起
Anti-F4/80 [CI:A3-1]，大鼠单抗，只认小鼠
腹腔灌洗收细胞，做 F4/80 流式，按常规把抗体稀释到 1/500。
上机，巨噬细胞那一群没分出来，跟阴性管重合。
把稀释度改成 1/10，同一批细胞，分群清楚了。
这支抗体的稀释比与别人不一样
多数流式抗体的工作浓度在 1/100 到 1/500 之间，习惯成自然就容易出事。
ab6640 的产品页写的是 1/10 到 1/50。这个数字比常规浓了一个数量级。
ICC/IF 给的是浓度，5 到 10 微克每毫升，不是稀释比。
两种写法要换算一次再用，不要凭经验直接折算。产品页标的分子量是 96 千道尔顿，做 WB 的话条带位置在高分子量区，可惜这支没有验证 WB。
这个克隆的事实
CI:A3-1 克隆，大鼠单克隆，IgG2b 亚型，靶点是小鼠的 Adgre1，也就是 F4/80。
种属只写小鼠。人样本不适用，人和小鼠的 EMR1 基因在进化上差异较大。
验证应用两个：流式胞内染色和 ICC/IF。没有 WB，做免疫印迹要另找抗体。
流式的同型对照推荐 ab18536，大鼠 IgG2b。ICC/IF 的二抗推荐 ab150165，山羊抗大鼠 Alexa Fluor 488。
纯化方式是 protein G 亲和纯化，液体剂型。大鼠 IgG2b 的 Fc 段跟小鼠的结合特性不一样，二抗要选抗大鼠的。
组织里的巨噬细胞怎么取
F4/80 是膜蛋白，消化时间过长会被切掉，流式上表现为阳性群整体左移。
腹腔灌洗这种收获方式最温和，细胞表面的抗原保留完整。实体组织酶解的时候，胶原酶浓度和时间要控制，取一部分细胞先做台盼蓝计数，活率低于八成，抗原状态往往也不好。上机前把电压调好，电压高了所有通道一起亮，分群反而更难。
组织切片上，F4/80 染的是巨噬细胞的膜和胞质，形状不规则。圆的是腹腔巨噬，不规则的是组织驻留型，判读要按形态分组。
三条操作建议
流式从 1/10 起，按 1/10、1/20、1/50 做三个梯度，挑分群最清楚的一档。每一步孵育都在冰上，室温放久了抗原会内化。
ICC/IF 按 5 到 10 微克每毫升配，用浓度算，不用稀释比算。封片之前把多余的抗体洗掉，背景多半来自没洗净的那部分。
同型对照跟一抗同浓度，同批二抗、同样洗涤次数。上机前先做死活染色，死细胞会非特异吸附抗体。
下一管流式，先把稀释度从 1/500 改回 1/20。
关键参数
| 反应种属 | Mouse |
| 抗原名称 | Adgre1 |
| 验证应用 | FCM, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rat / IgG2b |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein G |
| 推荐稀释 | ICC/IF 5-10 µg/mL We recommend ab150165 Goat Anti-Rat IgG H&L (Alexa Fluor ® 488) secondary antibody.；Flow Cyt 1/10 - 1/50 ab18536 - Rat monoclonal IgG2b, is suitable for use as an isotype control with this antibody. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
相关产品
点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。
| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab6640 | Anti-F4/80 antibody [CI:A3-1] - Macrophage Marker 本文产品 |
| Abcam | Ab111101 | Anti-F4/80 antibody [SP115] |
| Abcam | Ab16911 | Anti-F4/80 antibody [BM8] |
| Abcam | Ab300421 | Anti-F4/80 antibody [EPR26545-166] |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。