核染成空心圈，不算阳性

Anti-SOX2 兔多抗，35 kDa 核蛋白

球体切片的荧光图上，蓝核中间空着，绿信号绕着核边缘转了一圈。学生说这是膜染色，问是不是抗体不对。

这不是膜染色，是核周聚集。SOX2 是转录因子，信号该落在核内，落到核外就是没染好。

转录因子为什么必须落在核里

SOX2 属于 SRY 相关的 HMG 盒家族，靠 HMG 结构域结合 DNA 的特定序列，调控下游基因。它的工作场所在细胞核。

产品页给的分子量是 35 kDa，这个数对核蛋白来说不算大，进胶后靠近胶的中下部。

判读的时候，先看核的轮廓。真正的阳性核，信号在核质里铺开，核仁处往往是个暗区，看起来像一枚中间有孔的圆。

绕着核边缘的一圈亮，通常是两种原因。一是抗体浓度过高，非特异结合在核膜周围；二是透化不彻底，抗体进不到核里，只在细胞质和核膜之间堆积。

三个应用，判读标准不一样

WB 看的是 35 kDa 那条带。样本里如果有明显的降解，会看到下方一小片弥散信号。

IHC-P 看的是核的深浅和阳性比例。SOX2 的表达本身有梯度，干细胞巢里强，往外走弱。低倍下看到的强弱过渡，不一定是染色不均。

ICC/IF 最好和核染料一起看。信号与核染料的重合度，比信号强弱更能说明问题。重合度低的时候，先去调透化，不要去调浓度。

反应种属写的是人、小鼠、大鼠。做其他物种的时候，HMG 盒的序列保守度高，值得一试，但要自带阳性对照。

修复这一步最容易过

核蛋白的抗原决定簇在甲醛固定后容易被交联遮蔽，热修复是必要的。但修复过头，核的形态会变形，信号也会散。

Tris-EDTA pH 9.0 的缓冲液，微波中火，沸腾后维持十五到二十分钟。不要反复煮沸再冷却，一轮做完就够了。

修复完自然冷却到室温再上抗体。急着用冷水冲，切片容易脱，核也会缩。

三条操作建议

封闭用含 5% 正常血清的缓冲液，室温三十分钟。SOX2 抗体的非特异结合主要出现在结缔组织，封闭液里加一点去垢剂有帮助。

一抗四度过夜比室温两小时更稳。核内抗原的接触时间长一些，信号和背景的比例更好。

双标的时候，把 SOX2 放在第一个孵育，另一个标记放在后面。核内抗体的穿透更依赖前面的透化步骤。

球体和类器官样本另有一套注意点。整体球的中心常有坏死核，那一区的核染料和抗体信号都会弱，计数时把外层两三层和中心分开算，不要把中心算成阴性。

下次看片子，先把物镜推到四十倍，确认核质里是不是满的。空心圈不算数，计数之前先过这一关。

关键参数

反应种属	Human, Mouse, Rat
抗原名称	SOX2
验证应用	WB, IHC, IF/ICC
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Polyclonal
纯化方式	Affinity purification Immunogen
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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品牌	货号	品名
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