瓜氨酸化，跑胶会比原来快一点
Anti-H3 citrulline R2/R8/R17 兔多抗
关节炎模型的滑膜切片做完，WB 上组蛋白 H3 的位置比对照低了一点。学生以为是降解，加了蛋白酶抑制剂重跑，位置还是低。
这次不是降解。样本里做了一次钙离子处理，瓜氨酸化的比例上去了。
精氨酸变成瓜氨酸，电荷变了
肽酰基精氨酸脱亚氨酶把精氨酸的亚氨基水解掉，换成酮基，精氨酸就成了瓜氨酸。
这一步不改分子量，但改了等电点。精氨酸带正电，瓜氨酸不带。组蛋白本身碱性很强，靠正电荷和 DNA 的磷酸骨架结合，正电荷少一个，结合就松一分。
SDS-PAGE 上看到的轻微下移，来自构象和电荷的双重变化。位移通常在一个氨基酸残基的量级，肉眼能看出来，但不会移出一大截。
所以判断瓜氨酸化，不能只看位置。要拿没有诱导的样本并排跑，两条带的位置差才算证据。
三个位点写在一个名字里
产品名里列的是 R2、R8、R17，组蛋白 H3 上三个可以被瓜氨酸化的精氨酸。
同一支抗体能认三个位点，好处是信号强，坏处是没法区分哪一个位点被修饰了。要做位点归属，得靠肽阵列。
产品页的应用栏里就有一项 Peptide Array。把不同修饰状态的短肽点在一张膜上，逐条看结合强弱，能看出抗体对单个位点的偏好，也能看出它会不会把未修饰的 H3 认上去。
这一步对做机制的人有用。只做总量检测的，知道有三个位点就够。
IP 用法与应用的边界
应用里有 IP，组蛋白的免疫沉淀有几个固定难点。
组蛋白和 DNA 结合紧，裂解之后如果不做超声或者酶切，沉淀下来的是一整段染色质，不是单个核小体。沉淀里的其他组蛋白会一起被拉下来，检测结果容易误读。
洗脱条件也要注意。酸性甘氨酸洗脱对组蛋白的回收不错，但洗脱液要立刻中和，否则后面上样缓冲液的 pH 会被带偏。
上样前煮沸五分钟，不要更久。组蛋白量少，过度煮沸会加剧吸附损失。
应用写的是 WB、IP、肽阵列，没有 IHC。
做组织切片的时候，有人会拿这支去试，切片上出现核内信号。这个信号可能是真的，但没有经过验证，也没法和未修饰的样本做区分。要发图，风险在自己这边。
要做组织层面的瓜氨酸化，先找一支明确写了 IHC 的产品，或者用荧光双标把 H3 和瓜氨酸信号放在同一张图上比。
三条操作建议
诱导瓜氨酸化要补钙。PAD 酶依赖钙离子激活，裂解液里不加钙，修饰水平上不去，阴性结果不能说明问题。
WB 配 15% 的胶。组蛋白分子量小，浓度低了会跑到染料前沿，和溴酚蓝糊在一起。
上样量控制住。组蛋白在细胞核里丰度高，常规上样量容易过曝，把曝光时间压到几秒看一次。
下次做这组样本，把钙处理和钙螯合两组并排跑，膜上两条带的位置差，就是这一支要给你的答案。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | H3C1 citrulline R2 |
| 验证应用 | WB, IP, Peptide Array |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
相关产品
点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。