棕色脂肪，别放无霜冰箱
Anti-UCP1 兔多抗，免疫原 aa 100-200
肩胛间的脂肪垫取下来，一半放液氮，一半做石蜡。切片染完，产热的那一小块区域看得出多房脂滴，但棕色信号很淡。
同时跑的 WB 也淡，条带位置对，强度不够。抗体是新拆的，没过期。
翻产品页，储存条件里有一句，不推荐放在无霜冰箱。
无霜冰箱的问题在温度循环
无霜冰箱靠周期性加热化霜，箱内温度会有几度的波动。对多数抗体，这点波动不算什么。
对这支不一样。缓冲液里只有 PBS、0.1% BSA 和 0.097% 叠氮钠，没有甘油。没有甘油，冰点就没有被压低。反复的温度循环会让蛋白经历多次接近结冰的状态，聚集的风险高。
产品页另外写了两条，轻微浑浊时离心取上清再用，工作稀释液超过十二小时就丢弃。
这两条指向同一个问题，稀释后的抗体稳定性差。配好的工作液别放冰箱等到第二天。
UCP1 在线粒体内膜上
UCP1 是解偶联蛋白，位置在线粒体内膜。
它的作用是把质子梯度和 ATP 合成解耦，质子直接漏回去，能量以热的形式释放。棕色脂肪靠这个产热。
免疫原用的是人 UCP1 的 100 到 200 位氨基酸区间的合成肽，偶联了血蓝蛋白。这一段跨过几个跨膜结构域，抗体识别的是线性表位。
反应种属写的是小鼠和大鼠，没有列人。做人的样本要自己验证，不能凭序列保守度推断。
分子量 33 kDa。样本里如果线粒体富集过，条带会很干净；全细胞裂解液里，33 kDa 附近可能有别的膜蛋白干扰。
IHC 上多房脂滴是路标
棕色脂肪的形态特征很明显，细胞里有多个小脂滴，胞质被挤成薄薄一层，核偏在一边。
UCP1 的信号该绕着脂滴分布，落在胞质里，不是核里。
石蜡切片做 IHC，脂滴在脱水过程中被溶掉，留下一个个空泡。空泡周围那一圈着色，才是阳性。
用冰冻切片的话，脂滴保留，背景自发荧光强，要在紫外通道里先看一眼阴性对照。
三条操作建议
上机前把整支离心十秒，取上清。反复取用后出现的轻微浑浊，离心就能解决，别直接弃用。
IHC 的抗原修复用柠檬酸 pH 6.0，微波十分钟。这支的免疫原是线性肽，修复过头不会增强信号，只会抬高背景。
WB 前做一次线粒体富集粗提。差速离心拿到的粗线粒体组分里，UCP1 的相对丰度高一个量级，上样量能降下来，背景也跟着降。
明天分装的时候，把这支留在四度那层，别塞进无霜冰箱的抽屉。分装按每次用量，一支 50 µL，够跑十几次。
关键参数
| 反应种属 | Mouse, Rat |
| 抗原名称 | UCP1 |
| 验证应用 | WB, IHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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