间质一片深棕，肿瘤细胞是空的
波形蛋白兔多抗，八项应用含 IF-P
石蜡切片做波形蛋白，间质一片深棕，肿瘤细胞本身干干净净。学生说肿瘤是阴性的。
波形蛋白在间质细胞里本来就有。成纤维细胞、血管内皮、平滑肌都表达，染出来的深棕大部分是背景。
肿瘤细胞只有在发生上皮间质转化后才会表达。没转化的上皮性肿瘤，阴性是正常的。
波形蛋白是间质的底色
它是 III 型中间丝蛋白，构成细胞骨架。间叶来源的细胞都靠它维持形态，表达量高。
上皮细胞正常情况下不表达，靠角蛋白。转化之后角蛋白下调，波形蛋白上调，细胞获得迁移能力。
所以单看波形蛋白，分不清是肿瘤表达还是间质混入。
切片上还有一种情况。肿瘤浸润的边缘，间质被挤压成薄薄一层，紧贴着肿瘤巢，看着像肿瘤细胞自己在表达。放大后看细胞核的形态，能分开。
这支的事实
兔多克隆，IgG，未标记。反应种属人、小鼠、大鼠。
应用写了八项，WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC、IP，还有 IF-P 和 IF-FRO 两种免疫荧光。
IF-P 是石蜡切片的免疫荧光，IF-FRO 是冰冻切片。这两个标注比笼统写 IF/ICC 有用，做石蜡荧光时能直接参考。
八项覆盖面广，但每项的最适浓度不同。WB 和组织染色的稀释要分开记，不能一个数用到底。
双标才能定位
配一个上皮标记一起染，比如广谱细胞角蛋白。双阳的细胞才算发生了转化。
单标时看到的间质信号，在双标里会被角蛋白的阴性区域框出来，混不进去。
通道选择上，波形蛋白在间质里信号强，放在弱一点的通道，避免过曝。
建议
做 EMT 判读，至少三个标记一起看。波形蛋白升、角蛋白降，再加一个转录因子核内阳性。
IF 做石蜡切片，修复用 EDTA，时间长一点。中间丝蛋白交联后不容易暴露。
WB 上波形蛋白的带很粗，上样量减到十微克，否则相邻泳道会串。
冰冻切片做 IF-FRO 时，固定后立刻染，别在缓冲液里泡着过夜。中间丝会塌，染出来是一团而不是丝状。
波形蛋白的 WB 在间叶来源的细胞里信号极强，上样十微克就够。多抗在这类样本上容易多出低分子量带，那是降解片段。IHC 用热修复，EDTA 比柠檬酸好，中间丝交联密，修复不足染出来是淡的。只做单标时，判读把间质区域排除，只看肿瘤巢内。
下次判读，先在低倍下找肿瘤的边界，再在高倍里只数边界内的细胞。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | VIM |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, FCM, IF/ICC, IF-P, IF-FRO |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Antigen affinity purification |
| 储存条件 | Store at -20°C. Stable for one year after shipment. Aliquoti |
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