LC3 两条带，看下面那条
LC3B 兔多抗，三属，五项应用
诱导自噬之后跑 LC3，上面那条带深了，下面那条反而浅了。学生说自噬被抑制了。
LC3 的两条带，位置高的那条是胞质型的 LC3-I，低的是接上磷脂的 LC3-II。II 进自噬体膜，位置更低。
诱导之后该看的是 II 的量，或者 II 比 I 的比值。只看上面那条，方向会反。
两条带怎么来的
LC3 合成出来是前体，被切掉一段，变成胞质的 LC3-I。
自噬启动后，LC3-I 在几套连接酶的作用下接到磷脂酰乙醇胺上，变成 LC3-II，插进自噬体膜。
II 的分子量比 I 小一点，跑胶时位置更低。这个差别不大，胶要够长才分得开。
上面那条变深而下面没变，常见的原因是通量没上去，只是 LC3 的转录被诱导了，总量增加，转化比例还是原来的。
另一种可能是 II 被降解得快。自噬体一和溶酶体融合，II 就跟着被清掉，稳态下看不到积累。
这支的事实
兔多克隆，IgG，未标记。靶点标的是 LC3B。反应种属人、小鼠、大鼠。
应用五项，WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。产品页没有给固定稀释比。
说明里提到 LC3 有三个亚型，A、B、C，都经历翻译后修饰。这支识别的是保守区。
多抗的亚型问题
三个亚型同源性高，多抗有可能都认。跑出来不止两条带，判读时要留余地。
做亚型特异的实验，得换单抗。这支适合看总体自噬水平。
WB 上 II 带很弱，尤其是基础状态。上样量要够，胶的浓度选 12% 以上。
转膜这一步也影响结果。II 带小，容易穿过去，用孔径小一点的膜，转膜时间缩短。
建议
诱导和抑制要配对做。只做诱导，看到 II 升高，也可能只是阻断了下游降解。
加一组溶酶体抑制剂。II 继续升，说明通量真的上去了；II 不升，说明堵在降解那一步。
判读 IF 看的是点状信号。LC3 在自噬体上成点，弥散的胞质信号不算。
计数时每个细胞数点数，至少三十个细胞取平均。只看代表性视野，容易把差异看大。
WB 别用牛奶封闭。II 带本来就弱，牛奶会再压一层，用 5% BSA。转膜用 0.2 微米的膜，0.45 的会穿过去。想直接看自噬体，做电镜，WB 只能给通量的间接证据。IF 计数时把细胞分成低、中、高三档，比只算阳性率更能看出处理的效果。抑制剂用氯喹或者巴弗洛霉素，浓度和时间要预先摸。
下次跑 LC3，把胶跑到溴酚蓝出底线，两条带才分得开。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | LC3B |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, FCM, IF/ICC |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Antigen affinity purification |
| 储存条件 | Store at -20°C. Stable for one year after shipment. Aliquoti |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| proteintech | 14600-1-AP | LC3 Polyclonal antibody 本文产品 |
| proteintech | 18725-1-AP | LC3B-Specific Polyclonal antibody |
| Abcam | Ab192890 | Anti-LC3B antibody [EPR18709] - Autophagosome Marker |
| Abcam | Ab48394 | Anti-LC3B antibody - Autophagosome Marker |
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