内参跑歪了，先看这条
α-Tubulin 兔多抗，八个应用
同一批样本跑两块胶，上样量按 BCA 定的一模一样，α-Tubulin 内参一块平一块歪。
歪的那块，右侧两个孔明显低。查记录，那两个孔是收尾时才加的样，样品在冰上放了四十分钟。
内参不平时，先别怀疑抗体。上样顺序、样品放置时间、裂解是否彻底，这三件事比抗体更容易出问题。
微管蛋白的基本盘
α-Tubulin 和 β-Tubulin 结合成异二聚体，再聚合成微管。它在细胞里含量高，稳定，所以常被拿来当内参。
分子量在 50 kDa 附近。这个位置在大多数胶上分辨率不错，跟常见的目标蛋白不打架。
它有几个亚型，不同组织里比例不一样。做神经组织样本时，条带可能比常规细胞系更宽一点，这属于正常。
它还有可溶性的游离池。做细胞骨架提取时，一部分微管蛋白留在上清里，全裂解液能保住这部分。
这支的事实
Proteintech 的兔多抗，IgG，不带标记。反应种属写了人、小鼠、大鼠三个。
应用列了八项，WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC、IF-FRO、IP。这个覆盖面在同靶点抗体里算宽的。
多抗做内参有个好处，识别位点多，不同裂解条件下降解一部分也不至于完全没信号。坏处是批间差异，换批要重新定上样量。
IP 用它拉微管结合蛋白也常见。拉之前用紫杉醇把微管稳定住，复合物不容易散。
内参不齐怎么查
先看胶。转膜不均、气泡、边缘效应，都会让同一排条带高低不一。把膜翻过来对着光看，气泡位置跟歪的孔对得上就找到了。
再看样品。蛋白定量做没做，BCA 还是 Bradford，裂解液是不是同一批。这些不一致，上样量算得再准也没用。
抗体放第三步看。同一管抗体分两次实验，一次平一次歪，那问题在操作不在试剂。
三个环节排除完再换货号，能省下不少试错成本。
还有一个容易忽略的点，转膜液的甲醇比例。一起跑的样本要统一，浓度变了迁移率跟着变。
三条操作建议
配好的样品煮沸后分装冻存，不要反复冻融。反复冻融的样品，内参条带会一次比一次弱。
上样顺序固定，从左边第一个孔开始按组别排，每组孔数一致。别按浓度高低临时调，调完容易记错。
做定量时用同一张膜上的内参归一化，不要跨膜比较。
内参只是相对量。跨胶比较之前，先确认两块胶的上样和曝光条件一致。
下次跑胶前，把样品从冰上拿出来的顺序写在纸上，按纸上的顺序加样。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | Alpha Tubulin |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, FCM, IF/ICC, IF-FRO, IP |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Antigen affinity purification |
| 储存条件 | Store at -20°C. Stable for one year after shipment. Aliquoti |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| proteintech | 11224-1-AP | Alpha Tubulin Polyclonal antibody 本文产品 |
| proteintech | 66031-1-Ig | Alpha Tubulin Monoclonal antibody |
| Abcam | Ab48389 | Anti-Detyrosinated alpha Tubulin antibody - Loading Control |
| Abcam | Ab7291 | Anti-alpha Tubulin antibody [DM1A] - Loading Control |
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