波形蛋白，鱼也能染
Vimentin 鼠单抗，五物种，克隆 RV202
小鼠肝切片染波形蛋白，用鼠源一抗配抗鼠二抗。整片棕色，连不该有的区域也染上了。
换成一抗换物种的方案，同样的切片，信号只落在间质和血管壁。
问题出在二抗。抗鼠二抗认的是小鼠 IgG，而切片本身全是小鼠蛋白，内源免疫球蛋白被一起染了。
它是间质细胞的骨架
波形蛋白是 III 型中间丝蛋白，主要在间质来源的细胞里表达。上皮细胞换成间质表型时，它会上调，这是 EMT 的经典标记。
它跟角蛋白构成互补关系。上皮用角蛋白，间质用波形蛋白，两者很少同时高表达。
正因为这个特点，它在肿瘤侵袭前沿的判读里很常用。肿瘤巢内部阴性、边缘阳性，是常见的图样。
它在损伤修复里也会上调。纤维化的组织里，肌成纤维细胞靠它维持形态，染色会明显变强。
这支的事实
克隆号 RV202，小鼠单抗，IgG1。反应种属写了人、小鼠、大鼠、猪、鱼五个。
应用四项，WB、IHC、FCM、IF/ICC。稀释给得很细，石蜡切片 1/100 到 1/1000，冰冻切片 1/100 到 1/200，ICC/IF 按 1 µg/mL，胞内流式 1/100 到 1/200。
五个种属里包括鱼，做斑马鱼的研究能直接对上。
1 µg/mL 这个写法要留意，按浓度配，别按比例估。
鼠源一抗做鼠组织
这是这支抗体最需要注意的地方。一抗是小鼠来源，二抗如果是抗鼠的，就会跟组织里的内源小鼠 IgG 交叉。
三个绕开的方向。一，用小鼠组织做切片时，二抗换成抗小鼠 IgG 亚型特异的，只认 IgG1，不认全 IgG。
二，用 MOM 试剂盒，先把内源 Ig 封住再染。三，换一支兔源或者别的宿主的波形蛋白抗体。
冰冻切片的推荐里还有一句，PFA 固定的组织用 1/1000。固定方式不同，浓度差十倍，别用同一个数。
另一个方向是把切片做成冰冻的。冰冻切片不用热修复，内源 IgG 的问题也轻一些。
三条操作建议
石蜡切片从 1/200 起，1/100 留给信号弱的样本。说明书提到小鼠样本做 IHC-P 时有替代货号，做不出信号可以对照看。
ICC/IF 按微克算，1 µg/mL 起。按稀释比算容易配错，尤其抗体原液浓度不是 1 mg/mL 的时候。
流式做胞内染色，固定破膜后再染。波形蛋白在胞内，表面染色染不到。
封片前用苏木素复染一下。核的位置看得清，判断信号落在哪一层更准。
下次做小鼠组织，先确认一抗宿主，再决定二抗。这两步错一步，整批切片都得重来。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Pig, Fish |
| 抗原名称 | VIM |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG1 |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein G |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/100 - 1/1000 We recommend ab92547 as an alternative for IHC-P with mouse samples.；ICC/IF 1 µg/mL；Flow Cyt (Intra) 1/100 - 1/200；IHC-Fr Recommended range is 1/100 - 1/200 for Immunohistochemistry with avidin-biotinylated horseradish peroxidase complex (ABC) as detection. For PFA fixed tissue use at 1/1000. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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