CD4 的石蜡片子，1/1000
CD4 兔单抗，IHC-P 1/1000
肿瘤切片染 CD4，想看瘤内浸润的辅助 T 细胞。按常规 1/100 配一抗，整片背景发黄，阳性细胞分不出来。
降到 1/500 还在，直到 1/1000，背景退下去，淋巴细胞膜上的棕色清楚了。
说明书上写的就是 1/1000。这支的推荐浓度比同靶点的多数抗体低一个数量级。
膜上的一根线
CD4 是 T 细胞表面的共受体，跟 MHC II 类分子结合，辅助 TCR 识别抗原。
它主要在一群 T 细胞上，也在单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞上低水平表达。判读的时候要结合形态，不能只按颜色算。
染色图样是膜。细胞膜上一圈棕色，胞质和核都空着，这是阳性该有的样子。整团胞质都染上，多半是浓度过高。
它还会从膜上脱落。样本处理时间长了，可溶性的 CD4 丢在缓冲液里，染色变弱，这时候换抗体没用。
这支的事实
克隆号 EPR19514，兔单抗，IgG。反应种属只写了小鼠一个。
应用列了四项，WB、IHC-P、IHC-Fr、IP。稀释分别是 IHC-P 1/1000，冰冻切片 1/200，WB 1/1000，IP 1/40。
石蜡切片的修复写得很明确，Tris/EDTA pH 9.0，热修复。这个条件对膜蛋白的决定簇暴露很关键。
IP 那条对膜蛋白要求高。裂解液要温和，拉下来的复合物还得能跑胶。
1/1000 这个数字
兔单抗的亲和力高，1/1000 还能保持足够信号，这在膜蛋白上尤其明显。
但低浓度有个前提，修复必须到位。修复不足，抗原没露出来，浓度再低就是全阴性；修复过头，背景反而上来。
两个因素绑在一起，所以别单独调一个。修复条件定了以后，再在这个基础上拉浓度梯度。
IHC-Fr 写的是 1/200，比石蜡浓五倍。冰冻切片没经过交联固定，抗原保存得好，理论上应该更省，这里反过来，说明这支在冰冻样本上的结合效率不同，按说明书走。
背景高的时候先看封闭。血清封闭剂里的免疫球蛋白可能被二抗认到，换成无血清封闭液试一次。
三条操作建议
小鼠脾脏做阳性对照。脾脏里 CD4 阳性细胞密集，染出来是一片，适合定条件。
判读只看膜。核染深的细胞不算阳性，胞质弥散的也不算。
IP 用 1/40，拉之前先预清除。CD4 是膜蛋白，裂解液里要用温和的去垢剂，别用 SDS，会把复合物拆散。
下次配一抗，把这支单独放在一个盒子里，标签上写 1/1000，跟其他按 1/100 配的分开。
关键参数
| 反应种属 | Mouse |
| 抗原名称 | CD4 |
| 验证应用 | WB, IHC, IP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/1000 Perform heat-mediated antigen retrieval with Tris/EDTA buffer pH 9.0 before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/1000；IP 1/40；IHC-Fr 1/200 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
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