上机前那一步，别省
小鼠 CD16/CD32 封闭，大鼠源单抗
脾脏单细胞悬液染表面标记，同型对照那一管也亮。样本和对照一起右移，两群叠在一起，门画不出来。
染色方案里查了一遍，一抗浓度、二抗、洗涤都没问题，唯独少了封闭那一步。
补上 Fc 封闭，孵育十分钟再染，同型对照回到原位，阳性群分开了。
封闭封的是什么
免疫细胞表面有 Fcγ 受体，CD16 和 CD32 是其中两个。它们的作用是结合抗体的 Fc 段。
流式用的检测抗体本身是免疫球蛋白，Fc 段会被这些受体抓住，产生不依赖抗原的信号。
这种结合在所有带髓系细胞的样本里都存在。脾脏、骨髓、肿瘤浸润免疫细胞，都是重灾区。
巨噬细胞和 NK 细胞表面这两个受体密度最高，做肿瘤浸润样本几乎每次都要封。
这个信号在双标和胞内染色里也会出现。表面标记染完，胞内那一步破膜不彻底，Fc 段照样能结合上去。
这支的事实
克隆号 2.4G2，大鼠来源的单抗，IgG2b，κ 链。不带标记。
它识别小鼠 FcγIII（CD16）和 FcγII（CD32）受体胞外域上一个共同的非多态性表位。一个抗体同时封住两个受体。
应用列了四项，FCM、IF-FRO、IP、Blocking。这个组合说明它的用途就是把 Fc 段挡掉。
也有报道说它能通过自身的 Fc 段结合 FcγI 受体（CD64）。这一点在需要完全封闭的场合值得留意。
不带标记是它的用法决定的。封闭不需要荧光，也不需要酶，加进去挡住就行。
用在染色流程的哪一步
封闭放在 Fc 受体阻断这一步，在加检测抗体之前，跟封闭液一起孵育。
孵育温度按产品页来。这支没写特殊要求，按常规冰上操作。
顺序不能反。先加了一抗再封闭，一抗已经结合上去了，封不住。
封闭之后不要洗，直接加染液。洗掉之后受体重新暴露，等于没封。
同型对照要跟样本走同一套流程，包括封闭。只给样本封不给对照封，两者的本底不一样，比较就没有意义。
三条操作建议
用量按细胞数算，不按体积。每管细胞数变化时重新算，别固定加同一个体积。
封闭液里不要加血清做双重封闭，除非血清来源跟检测抗体对得上。血清里也有免疫球蛋白，可能干扰。
做胞内染色时，固定之后再封一次。固定会改变受体状态，有些表位在固定后才暴露。
封闭之后不加洗涤，但染色各步之间照常洗。封住的是 Fc 受体，其他非特异结合还得靠洗掉。
下次排方案，把封闭这一步写进流程表的第二行，紧跟在计数之后，别靠记忆临时补。
关键参数
| 反应种属 | Mouse |
| 抗原名称 | BD Fc Block™) |
| 验证应用 | FCM, IF-FRO, IP, Blocking |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Rat SD, also known as Sprague-Dawley (outbred) IgG2b, κ |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | affinity chromatography |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| BD Pharmingen | 553142 | BD Pharmingen™ Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block™) 本文产品 |
| BD Pharmingen | 553141 | ™ Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block™) |
| BD Pharmingen | 550274 | ™ Purified Rat Anti-Mouse CD31 |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。