GFAP 只验证了 WB，切片先别急
山羊多抗，四个种属，50 kDa，仅 WB 验证
做脊髓损伤模型的星形胶质细胞活化，切片染 GFAP，反应性星形胶质细胞的形态很清楚。
想换个应用，拿同一支抗体去做流式，染不出来。
翻产品页才发现，这支只验证了 WB。
一个应用验证过的抗体，不等于能平移到别的应用上，中间差的是样本处理和表位暴露。
40 到 50 kDa 之间那几条带
GFAP 的主带在 50 kDa，产品页标的分子量就是这个数。
实际跑出来常在 45 到 50 之间出现多条，中间丝蛋白有多个异构体，也有降解产物。
判断是不是降解，看条带是否随样本放置时间变多，冻融次数多的样本更明显。
如果条带整体偏弱，先查转膜，GFAP 是中间丝蛋白，容易残留在胶里，转完染一下胶就知道。
另外，GFAP 在反应性星形胶质细胞里会上调，损伤组条带变粗是生物学变化，不是上样多了。
定量时只取主带，别把下面那条一起框进去，否则组间差异会被稀释。
这支的事实
山羊多抗，IgG，无标记，抗原亲和纯化，柱子上偶联的是免疫原。
免疫原是人 GFAP 第 400 位到 C 端的合成肽，这一段跨种属保守，所以人、牛、小鼠、大鼠都能用。
规格 100 µg，缓冲液是 0.5% BSA 加 0.5% Tris，pH 7.3，含 0.02% 叠氮钠。
应用一栏只有 WB，流式、IP、IF 都没有验证，要做就自己摸条件。
多抗的批间差异比单抗明显，换批号要重跑一次阳性对照。
脑以外的样本里 GFAP 也有表达，做外周组织时阳性对照选星形胶质瘤细胞系，比拿脑匀浆做对照更直接。
山羊来源带来的二抗选择
山羊来源的一抗，二抗要用抗山羊，别拿抗兔或抗鼠的凑，种属对不上什么都染不出来。
抗山羊二抗的交叉反应是老问题，选吸附过的品种，尤其是做多重染色的时候。
如果样本本身含大量内源免疫球蛋白，比如脾或炎症组织，二抗背景会抬高，加一步血清封闭。
封闭血清用与二抗同种属的正常血清，5% 到 10%，室温二十分钟，比加长洗涤有效。
做 WB 时二抗稀释按厂家建议走，抗山羊的效价通常比抗兔低一些，浓度要给足。
三条操作建议
产品页没有给稀释比，WB 从 1/1000 起，按条带强度和背景调。
上样量按总蛋白 20 到 30 µg，GFAP 在损伤组织里表达上调，正常组织要多上一点才看得见。
缓冲液里不含甘油，-20°C 存放时注意分装，别整管反复冻融。
下次做损伤模型，同一块胶上放正常、损伤七天、损伤十四天三个时间点，趋势一次看清。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | GFAP |
| 验证应用 | WB |
| 宿主/亚型 | Goat / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。