PCNA 数细胞，不数深浅
兔单抗 [EPR3821]，29 kDa，人鼠大鼠
肿瘤组织做 IHC，PCNA 染出来一片深浅不一的棕。
按强弱分级，两个人读同一批片子，结果对不上。
PCNA 是增殖标记，判断标准是阳性细胞的比例，不是颜色深浅。
强度受修复和孵育时间影响太大，数细胞比看深浅可靠。
29 kDa 附近的一条带
PCNA 的分子量是 29 kDa，产品页给的就是这个数，UniProt 编号 P12004。
WB 上偶尔在 36 kDa 附近出现第二条带，那是别的蛋白或者修饰形式，用敲除样本能确认。
PCNA 在增殖细胞里丰度高，上样量不用大，10 µg 就够。
血清饥饿的细胞 PCNA 会掉，做对照时用对数生长期的细胞做阳性。
石蜡切片放久了抗原会掉，三年以上的旧片先做一张阳性对照再上大批，不然整批白染。
切片厚度统一 4 µm，厚薄不一会让同一视野里的细胞数差出一倍。
这支的事实
兔重组单抗，克隆号 EPR3821，IgG，无标记，Protein A 亲和纯化。
种属是人、小鼠、大鼠，应用列 WB、IHC-P、ICC/IF、流式胞内、流式、IP 六项。
缓冲液是 PBS 加 40% 甘油和 0.05% BSA，pH 7.2 到 7.4，含 0.01% 叠氮钠。
同一克隆号还有别的偶联形式，做多重染色时可以找直标版本。
产品页只写了 WB 和 IHC 的验证，其余应用要自己摸条件。
计数比染色深浅更可靠
选五个随机视野，每个视野数三百个细胞，算阳性百分比。
阳性判定统一口径：核染明确就算，不管深浅。
坏死区和切片边缘的染色常出现假阳性，计数时避开这两个区域。
同一批片子由同一个人读，或者两个人盲读后取平均，读片前先把标准写下来。
结果用百分比报告，附上视野数和放大倍数，别人重复时才有依据。
增殖指数高的肿瘤里 PCNA 几乎全阳，这时换一个标记才有区分度。读片时先把坏死区圈出来单独统计，否则整片算下来阳性率虚低。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，IHC 从 1/2000 起，WB 从 1/5000 起。
修复用 EDTA pH 9.0，高压三分钟，PCNA 对修复条件不挑剔，但批间要统一。
流式胞内染时，固定后用 0.1% Triton 通透十分钟，抗体量加倍。流式胞内染 PCNA 时，通透后要洗两遍，残留的 Triton 会让细胞聚团。
下次读片前先定好计数规则，写在一张纸上贴在显微镜旁边。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | PCNA |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, IP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab92552 | Anti-PCNA antibody [EPR3821] 本文产品 |
| Abcam | Ab18197 | Anti-PCNA antibody |
| proteintech | 10205-2-AP | PCNA Polyclonal antibody |
| proteintech | 60097-1-Ig | PCNA Monoclonal antibody |
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