AC-15 的稀释比，能给到 1/16000

Anti-beta Actin [AC-15]，小鼠单抗，七种属交叉

配一抗的时候，你按习惯取了 1 微升加到 5 毫升稀释液里，1/5000。

这个比例用在 AC-15 上偏浓。厂家的推荐范围是 1/5000 到 1/16000，上限比下限省三倍的抗体。

图 1　Western blot 验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

稀释上限说明了什么

一支内参抗体的推荐上限，反映的是效价。能拉到 1/16000 还有信号，说明亲和力和浓度都够。

实际做的时候，先用上限试。信号弱了再往下调，比一开始就浓着用更好调。

浓着用的代价是背景。β-actin 在几乎所有细胞里高表达，抗体浓了，非特异的条带也跟着出来，36 kDa 附近看着干净，下面一点就开始有东西。

另一个代价是浪费。1/5000 和 1/10000 的差别，一年下来就是一整支抗体的钱。

AC-15 的事实

Ab6276 用的是 AC-15 克隆，小鼠单克隆，IgG1 亚型。

反应种属覆盖人、小鼠、大鼠、狗、猴、牛、仓鼠，七种。做一个跨物种的课题，一支内参能省掉很多比对工作。

验证应用是 WB 和 ICC/IF。WB 推荐 1/5000 到 1/16000，ICC/IF 用 5 微克每毫升。

AC-15 在实验室里用得久，很多人从研究生阶段就用它。用得久的一个副作用是，大家默认它不会出问题，配液时不计算，凭手感取 1 微升。

用得顺手的抗体最容易掩盖操作问题。背景高了先怪样本，其实可能只是这一管已经冻融太多次。

什么时候该换内参

β-actin 在肌肉组织里表达量会变。心肌和平滑肌样本用它做内参，处理组之间的差异可能来自表型本身。

做核蛋白或者膜蛋白，β-actin 不在同一个组分里，用它归一化没有意义，换 Lamin B1 或者膜蛋白标志物。

做分泌蛋白，内参基本帮不上忙，只能靠上样体积和浓缩倍数控制。

一个更省事的判断办法。内参在很多组之间波动超过三成，就说明它不适合这批样本，别硬用。

换内参之前先确认不是上样误差。同一个样本重复三次，内参深浅稳定，问题在样本；忽深忽浅，先查移液器。

两条实操

分装。1/16000 的稀释比，让一管抗体能用很久，反复冻融是效价掉得最快的方式。十微升一管，冻在负二十度。

封闭液用 5% 脱脂奶粉还是 3% BSA，看二抗。HRP 二抗配奶粉问题不大，做磷酸化蛋白别用奶粉，酪蛋白本身就是磷酸蛋白。

明天配一抗，把 AC-15 从 1/5000 改成 1/10000，看条带还在不在，背景是不是更干净。

关键参数

图 2　Western blot 验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

相关产品

点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。

参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。