c-Myc 的半衰期，短到能毁掉一批样本
Anti-c-Myc [Y69]，兔单抗，ChIP 与 CUT&RUN 验证
六孔板放在冰上，一孔一孔刮下来。刮到第四孔的时候，计时器已经走了十二分钟。
跑完胶，c-Myc 的条带比预期浅很多。
这个蛋白的半衰期只有半小时左右。样本处理慢一点，测到的就是降解后的量。
为什么 c-Myc 难测
c-Myc 是转录因子，靠泛素化途径快速周转。
细胞状态一变，蛋白水平就跟着变。血清饥饿、接触抑制、甚至换液这个动作，都会让它在半小时内掉下去。
所以测 c-Myc，比的不是抗体，是收样的速度。
同样的道理适用于其他短半衰期的转录因子，收样流程要按它们的节奏设计。
设计流程时把这半小时算进去，比事后补实验省事。
Y69 这支克隆的参数
Ab32072 是 Y69 克隆，兔单克隆，IgG 亚型，识别人、小鼠、大鼠的 c-Myc。
验证应用给得很全。WB、IHC-P、流式胞内、ICC/IF、IP，还标注了 ChIP-seq 和 CUT&RUN-seq。
稀释比和用量分开。WB 1/1000，IHC-P 5 微克每毫升，ICC/IF 5 到 10 微克每毫升，流式胞内 1/50，IP 5 微克每毫升。
做 IP 和 CUT&RUN 是按微克给的，不是按稀释比，换算的时候注意。
一支抗体同时覆盖 IP 和 CUT&RUN，做蛋白-DNA 互作的课题可以少买一支。
验证列表长，说明厂家在这几个系统里都跑出过结果，选型时省掉不少试错。
收样的具体做法
培养基倒掉，立刻加冰上预冷的 PBS 洗一遍，加裂解液，全程在冰上。
裂解液里现加蛋白酶抑制剂。PMSF 单独加，它自己也会水解，配好半小时内用完。
做 ChIP，交联要在收样后马上做，甲醛固定能把蛋白的周转停住。
做降解实验，加放线菌酮之后按时间点收，从 0 到 60 分钟，每 15 分钟一个点。
每个时间点直接加 SDS 上样缓冲液煮沸，别先冻存再处理。
IP 和 CUT&RUN 的差别
IP 拉内源 c-Myc，5 微克每毫升对常规细胞量够用。细胞数增加，抗体按比例加。
CUT&RUN 对细胞数要求低，几百到几万个细胞都能做，抗体量不用跟着降太多。
两者的染色质片段要求不一样。IP 要 200 到 500 bp，CUT&RUN 不用超声，靠核酸酶切。
对照也不一样。IP 用 IgG，CUT&RUN 还要加外源 DNA 做封闭。
下一批样本，六孔板全部放在冰上一起处理，收完第一孔开始计时，看能不能压到五分钟以内。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | MYC |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, IP, ChIP-seq, CUT&RUN-seq |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 5 µg/mL ab172730 - Rabbit monoclonal IgG, is suitable for use as an isotype control with this antibody. Perform heat-mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/1000；ICC/IF 5-10 µg/mL 1/100.；Flow Cyt (Intra) 1/50 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
相关产品
点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。
| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab32072 | Anti-c-Myc antibody [Y69] - ChIP Grade 本文产品 |
| Abcam | Ab9132 | Anti-Myc tag antibody - ChIP Grade |
| Abcam | Ab185656 | Anti-c-Myc (phospho S62) antibody [EPR17924] |
| Abcam | Ab9106 | Anti-Myc tag antibody |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。