鸡 IgY 做 MAP2，二抗别拿错
Anti-MAP2，鸡多抗，小鼠与大鼠神经元标记
原代神经元培养到第十四天，做 MAP2 染色看树突形态。
一抗孵育过夜，第二天加抗兔二抗，孵完上镜，什么都没有。
翻了订单才发现，这支一抗是鸡源。
IgY 跟 IgG 不是一回事
鸡的免疫球蛋白叫 IgY，存在于卵黄里，分子结构和哺乳动物的 IgG 差得远。产品页标的分子量是 200 千道尔顿，比 IgG 大一圈，做 WB 的时候转膜时间要相应延长。
好处是不结合哺乳动物细胞的 Fc 受体，也不激活补体。做组织切片和原代培养的时候，背景比哺乳动物来源的抗体低一档。
代价是二抗必须配鸡。抗兔、抗鼠的二抗都认不上，因为它们的靶点是哺乳动物 IgG 的 Fc 段。
另一个差别是 IgY 不被蛋白 A 或蛋白 G 结合。做 IP 的时候不能沿用常规的珠子，要选能结合鸡 IgY 的试剂。
实验室里常备的是抗兔和抗鼠，抗鸡的二抗用得少，容易临时抓错。
这支抗体的数据
ab5392 是鸡多克隆，IgY 亚型，靶点是 MAP2。种属写的是小鼠和大鼠，人样本不在列。
验证应用三个：WB、IHC-P 和 ICC/IF。原代神经元和脑切片的免疫荧光是它的主场景。
产品页没有给稀释比。多抗做神经元染色时，浓度窗口比较宽，但背景也跟着上来，第一片建议从稀的一档试。
纯化方式产品页没有写明，液体剂型。多抗的批间差异要靠每批实测，换批之后先跑一孔确认形态。
MAP2 判读要看哪一层
MAP2 结合微管，主要分布在树突和胞体，轴突里几乎没有。这一分布特征让它成为区分树突与轴突的常用标记。
判读时看的是形态，不是强度。健康的神经元，MAP2 沿树突铺成连续的线条，分支清楚；损伤之后线条断裂，出现点状或团块。
只看平均荧光强度会把萎缩的树突算成弱阳性，形态学的评估更可靠。数分支可以用 Sholl 分析，比人工数更一致，尤其是树突密集的视野。共聚焦用低倍还是高倍物镜，按树突的分支跨度来定。
三条操作建议
二抗换成抗鸡 IgY 的，标记物按实验需要选，这一条最容易漏。封闭用正常羊血清，不要用含 IgY 的阻断剂。
固定用多聚甲醛，不要用甲醇。甲醇会破坏微管结构，MAP2 的形态学信息会丢。
拍共聚焦的时候针孔和增益固定，组间可比性靠这两个参数，不靠后期调亮度。原代培养的片子封片之后尽快拍，树突太细，放两天荧光会衰减。
下一批片子，先把二抗换对，再谈染色条件。
关键参数
| 反应种属 | Mouse, Rat |
| 抗原名称 | MAP2 |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Chicken / IgY |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 +4°C |
相关产品
点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。
| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab5392 | Anti-MAP2 antibody - Neuronal Marker 本文产品 |
| Abcam | Ab32454 | Anti-MAP2 antibody - Neuronal Marker |
| Abcam | Ab11267 | Anti-MAP2 antibody [HM-2] - Neuronal Marker |
| Abcam | Ab92434 | Anti-MAP2 antibody - Neuronal Marker |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。