5 µg/mL 的抗体，别按比例兑

Anti-Ctip2 [25B6]，大鼠单抗，IHC 5 µg/mL

做皮层分层的那位同学，切片染完放在显微镜下，第六层深浅不匀，靠白质的边界糊成一片。

他判断是抗体不够，把原来的一抗从 5 µg/mL 提到 10 µg/mL，重染一遍。

背景跟着起来了，层界没有变清楚，白质里也浮出一层浅棕。

问题不在浓度高低，在他把浓度当成了比例。

IHC 写的是 5 µg/mL，不是 1/500

产品页给 IHC-P 的条件写的是 5 µg/mL，单位是浓度，不是稀释倍数。

这两个写法在操作上不一样。稀释倍数要先把抗体的标称浓度读出来，再折算成体积；浓度写法是可以直接算的，一张切片加多少微升，取决于你配多少体积的孵育液。

同一支抗体换批次，标称浓度可能不同，照抄上一批的比例，实际浓度就漂了。把 µg/mL 写进 SOP，比写 1/500 稳。

配的时候按张数算。一张切片 200 µL 孵育液，十张就是 2 mL，现配现用，剩下的不留到下周。

Ctip2 的染色落在核里

这支抗体的靶点是 BCL11B，一个核内的转录因子，在皮层的投射神经元里表达。

核染色和胞质染色的判读方式不同。核要看轮廓清不清、核仁是不是空的，胞质那层浅黄不计入阳性。

层界糊的时候，先看单个核的边界，再退到低倍看层次。低倍下觉得连续的棕色带，高倍常常是核叠在一起。

片子上的阳性分布本来就有梯度，靠近白质的那几层由密到疏，不要把正常梯度当成染色不均。

流式用 1 µg 对一百万细胞

产品页给流式的量是 1 µg 对应 10^6 个细胞，胞内染色，需要固定破膜。

同型对照要同宿主同亚型。产品页点名 ab18450 是大鼠 IgG2a，可以配这支做对照。

二抗按抗大鼠来选。破膜之后的样本非特异吸附多，二抗浓度不要跟着一抗一起往上加。

ICC/IF 给的是 1/500，和 IHC 的 5 µg/mL 不是一个系统，别把两个数混着用。

大鼠来源带来的二抗问题

宿主是大鼠，做小鼠组织的时候要留意二抗。

抗大鼠的二抗在小鼠组织上可能认内源免疫球蛋白，血管周围和损伤区最容易出现这层假阳性。

两个办法，孵育二抗前加 5% 正常小鼠血清封闭 30 分钟，或者直接换成预吸附的二抗。

如果只是做 ICC/IF，细胞样本的内源免疫球蛋白少，这一层干扰会轻很多。

明天开染之前，先把 5 µg/mL 这一行写进记录本，按张数配孵育液，同型对照那一管和样本放进同一个湿盒。

关键参数

反应种属	Human, Mouse
抗原名称	BCL11B
验证应用	WB, IHC, FCM, IF/ICC
宿主/亚型	Rat / IgG2a
抗体类型	Monoclonal
纯化方式	Multi-step chromatography
推荐稀释	IHC-P 5 µg/mL Perform heat-mediated antigen retrieval with citrate buffer pH 6 before commencing with IHC staining protocol.；ICC/IF 1/500；Flow Cyt 1 µg for 10^6 Cells ab18450 - Rat monoclonal IgG2a, is suitable for use as an isotype control with this antibody.
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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品牌	货号	品名
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