小鼠抗体染小鼠脑，背景这样压
Anti-NeuN [1B7]，小鼠单抗，IHC 5 µg/mL
脑片染 NeuN，海马齿状回那一圈颗粒细胞该是最深的，结果整张片子都蒙着一层灰棕。
降低一抗浓度，灰棕淡了，阳性也跟着淡。
换二抗，加长封闭时间，都只挪动一点点。
这位同学的样本是小鼠，抗体宿主也是小鼠。
三个系统，三个不同的量
产品页把三套条件分开写了，IHC-P 5 µg/mL，WB 1/1000 到 1/2000，ICC/IF 1 µg/mL。
同一个靶点，三个系统的用量差出一大截。组织切片要穿透、要过修复，抗体量给得足；膜上的蛋白已经跑开了，1/2000 就够。
ICC/IF 的 1 µg/mL 是按终浓度算的，细胞样本蛋白量少，浓度不必跟组织对齐。
把三个数抄进实验记录的时候，最好连单位一起抄，别互相换算。
这几个数之间还隔着一道抗原修复。柠檬酸 pH 6 热修复把表位揭出来，揭得透，抗体就能给得稀；揭不透，浓度往上加也只是在堆背景。
小鼠一抗染小鼠组织的麻烦
抗体的 Fc 段在小鼠组织里能找到同类。二抗认的是 Fc，于是内源免疫球蛋白被一起标了出来。
这层背景的特点是不均一，血管周围、脑膜、损伤灶边缘最重，灰质里相对干净。
常见的处理是孵育二抗前用正常小鼠血清封闭，或者选抗小鼠 IgG 的亚型特异二抗，这支是 IgG2b。
如果背景集中在血管，先怀疑内源 Ig，不要先怀疑抗体浓度。
还有一层容易混进来的是内源过氧化物酶。脑组织里含量不高，但血管中的红细胞带一点，DAB 显色前用 3% 过氧化氢处理十分钟，这层颜色就没了。
核标记怎么看
NeuN 染的是核，阳性是一个个清楚的圆点，核仁偏暗。
齿状回颗粒层、锥体细胞层这些地方，阳性核排得紧，低倍下像一道带。这道带的边界是判读的基准。
缺血、损伤模型里，NeuN 阳性会成片丢失，丢失区的边界比染色深浅更有信息量。
背景重的时候先看核仁是不是空的，再看阳性核的直径是不是一致，两个都对，才是真阳性。
上膜之前先定一抗
WB 的 1/1000 到 1/2000 这个区间，第一次做建议从 1/2000 起，40 µg 上样，看条带再说。
NeuN 的条带位置高，转膜时间不够容易转不透，这一步比调抗体浓度更常见。
做定量的话，同一次实验里所有样本用同一管稀释液，别分两天配。
明天先跑一张 WB 定下 1/2000 这个点，再从同一次裂解液里分组织做切片，两个系统的结论才对得上。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | NeuN |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG2b |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 5 µg/mL；WB 1/1000 - 1/2000；ICC/IF 1 µg/mL |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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